基于ITS和cpDNA分子标记的江西野生寒兰居群遗传结构研究-植物学专业论文.docxVIP

摘 要 兰科（Orchidaceae）植物是被子植物中最为进化的类群和物种数最为丰富 的 大 科 之 一 ， 其 中 大 多 数 为 世 界 珍 稀 濒 危 植 物 。 寒 兰 （ Cymbidium kanran Makino）为兰科兰属植物，具有很高的观赏价值和经济价值。江西省三面环 山，境内野生寒兰资源十分丰富，然而过度的采挖、林木砍伐以及森林火灾等 原因致使生态环境遭到严重破坏，野生寒兰的数量急剧减少。 本研究在调查江西省境内九连山脉、武夷山脉、罗霄山脉及九岭山脉野生 寒兰资源的基础上，采集了 17 个野生寒兰居群的 250 个样本，利用 ITS 和 cpDNA 分子标记对其进行遗传结构和遗传多样性研究。分析了江西省野生寒兰 居群的遗传结构、遗传分化、遗传多样性、谱系地理学以及基因流特点，探讨 了江西野生寒兰数量锐减的原因，旨在为江西野生寒兰资源的保护和合理利用 提供参考建议。主要研究结果如下： （1）江西省野生寒兰居群 ITS 序列总长度变化范围为 652 - 658bp， 其中 ITS1 长度范围为 240 - 241bp，5.8S 长度相对保守为 163bp，ITS2 长度为 245 - 253bp。ITS 总序列、ITS1、5.8S、ITS2 区域 G + C 含量的变化范围分别是 58.9%-67.1%、56.5% - 68.1%、54.3% - 62.4%、59.7% - 72.6%，序列中 G+C 的 含量明显较高。测序结果表明 ITS 序列全长共有 140 个变异位点和 117 个信息 位点。江西省 17 个野生寒兰居群的 250 个样本中共有 10 种 ITS 类型，其中有 16 个居群中含有 2 种及以上 ITS 类型（T2 分布最广），表明居群内存在变异。 尤其武夷山脉所含 ITS 类型最为丰富，为 8 种。寒兰 ITS 序列 AMOVA 分析显 示居群间遗传变异为 21.12%，居群内的遗传变异为 69.24%，表明居群内部的 遗传分化程度较高，而居群间的遗传分化程度相对较低。Nm = 1.1428，Nm 1，表明江西寒兰各居群间的基因流水平高。 （2）江西省野生寒兰 cpDNA 的 petB-petD 基因间隔区总长度为 522 - 529bp，G + C 的含量为 32.9% - 33.7%，共检测到 9 个变异位点和 5 个简约信息 位点。居群遗传多样性研究表明：17 个野生寒兰居群中共有 11 种单倍型，其 Ⅰ 中 Hap4 为该谱系的广布单倍型，15 个居群含有 2 种及以上单倍型，表明该居 群具有单倍型多态性。罗霄山脉和九连山脉各有 3 种单倍型，九岭山脉有 4 种，武夷山脉含有 7 种。通过 TCS 网状结构图推测 Hap4 为最原始的单倍型； 通过 HAPLONST 分析，居群间的遗传分化系数为 Gst = 0.413，Nst = 0.472， 使用 U 检验对 17 个寒兰居群进行谱系地理结构进行分析，UNst/Gst =1.08 U0.05 = 1.96，P 0.05，表明寒兰居群不存在明显的谱系地理结构。通过 IBD 对 17 个野生寒兰居群进行遗传距离与地理距离的相关性分析，结果显示两者 没有明显相关性（r = 0.0121，p = 0.5720），表明寒兰居群间的遗传分化程度 不是因为地理距离的远近造成的。cpDNA 序列变异分析（ AMOVA ）的结果 显示，寒兰居群间的遗传变异为 40.13% ，居群内遗传变异为 49.28% ，居群 内遗传分化程度大于居群间的遗传分化程度，Nm = 0.7839，表示居群间基因 流中等。 （3）通过 ITS 和 cpDNA 数据的综合分析显示，江西省 17 个野生寒兰居 群遗传多样性水平整体较高，而居群内部的遗传分化程度远高于居群间的遗 传分化程度，表明各大山脉不同居群间的基因流较大。其中，武夷山脉寒兰 野生居群的遗传多样性最为丰富，罗霄山脉次之，另两大山脉则相差不大。 在 17 个寒兰居群中以 SW 和 AF 两地居群内的遗传分化和变异水平最高，ITS 类型和单倍型种类最多。可能是因为两地都是位于两省山脉交界处的边缘效 应，使得居群间的基因流水平更高，而且两地都建立了国家自然保护区，周 边的生态环境良好，受到的人为干扰较少。 通过本实验的研究结果结合实际的调查采样情况对江西野生寒兰的资源 保护策略和开发利用提出如下建议：第一，对于遗传多样性丰富数量较多的 AF、SW、ZX、SC、TG、YF、JGS 等地采取建立自然保护区，并在周边设立 监督站点以就地保护；第二，对于遗传多样性水平较低，野生寒兰数量和分 布急剧减少的 JA、LN、LC、NF、AY、CY 等地采取人工引种结合快速繁殖 “回归”技术以尽快恢复当地野生寒兰居群的