血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响.PDFVIP

第３５卷第１１期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１１ ２０１３年６月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｊｕｎ．１５　２０１３ １０６７ 文章编号：１０００５４０４（２０１３）１１１０６７０４ 论著 血小板衍生生长因子Ｄ对体外破骨细胞分化过程的影响 刘栓得，初同伟，张　超，黄　晨，余世明，周　跃　　（４０００３７重庆，第三军医大学新桥医院骨科） 　　［摘要］　目的　用外源性血小板衍生生长因子Ｄ（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＤ，ＰＤＧＦＤ）体外刺激外周血单核细胞 （ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ＰＢＭＣｓ），观察其对破骨细胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ，ＯＣｓ）分化过程的影响。方法　采集外周血并 分离单个核细胞，实验分为３组：阳性对照组为ＮＦＢ配体激活因子（ｒｅｃｅｐｔｏｒｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆＮＦＢＬｉｇａｎｄ，ＲＡＮＫＬ）和巨噬 κ κ 细胞集落刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＭＣＳＦ）联合诱导，阴性对照组（细胞培养基）和实验组（ＰＤＧＦＤ）。 应用抗酒石酸酸性磷酸酶（ｔａｒｔｒａｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＴＲＡＰ）染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞（ｏｓｔｅｏ ｃｌａｓｔｌｉｋｅｃｅｌｌｓ，ＯＬＣｓ）的分化情况，ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测破骨细胞标志基因ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ、ＭＭＰ９ｍＲＮＡ的表达情况， Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞中ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ蛋白的表达，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞上清液中ＭＭＰ９的表达。 结果　 ＴＲＡＰ染色可见阳性对照组和实验组的ＯＬＣｓ显著多于阴性对照组。 阳性对照组和实验组ＴＲＡＰ、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ、 ① ② ＭＭＰ９ｍＲＮＡ的相对表达量均显著高于阴性对照组（Ｐ＜０．０５），但阳性对照组和实验组间无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。 ③阳性对照组和实验组 ＭＭＰ９（ＥＬＩＳＡ检测）、ＣａｔｈｅｐｓｉｎＫ蛋白（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测）表达均显著高于阴性对照组（Ｐ＜ ００５），但阳性对照组和实验组间无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结论　外源性ＰＤＧＦＤ可在无ＲＡＮＫＬ／ＭＣＳＦ的条件下于体 外独立诱导破骨前体细胞向ＯＬＣｓ分化。 　　［关键词］　 破骨细胞；ＮＦＢ配体激活因子；血小板衍生生长因子Ｄ κ 　　［中图法分类号］　Ｒ３２２．７１；Ｒ３２９．２１；Ｒ３４９．２１　　 ［文献标志码］　Ａ ＰｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＤｉｎｄｕｃｅｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎｉｎｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｉｎｖｉｔｒｏ ＬｉｕＳｈｕａｎｄｅ，ＣｈｕＴｏｎｇｗｅｉ，ＺｈａｎｇＣｈａｏ，ＨｕａｎｇＣｈｅｎ，ＹｕＳｈｉｍｉｎｇ，Ｚｈｏｕｙｕｅ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，ＸｉｎｑｉａｏＨｏｓｐｉｔａｌ， ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３７，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 ＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＤ（ＰＤＧＦＤ）ｏｎｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ（ＯＣｓ）ｆｒｏｍｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ（ＰＢＭＣｓ）ｉｎｖｉｔｒｏ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＡｆｔｅｒＰＢＭＣｓｗｅ