小鼠胚胎干细胞在丝素材料上向神经细胞分化的研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１２）：７２～７６ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 简　　报殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪 小鼠胚胎干细胞在丝素材料上向 神经细胞分化的研究 鲍柳君　叶　荣　韩　甫　张军超　张焕相 （苏州大学医学部基础医学与生物科学学院江苏省干细胞研究重点实验室　苏州　２１５１２３） 摘要　以小鼠胚胎干细胞（ＥＳ）为种子细胞，使用改良的４／４＋ＲＡ方案，诱导小鼠ＥＳ细胞在丝 素材料上向神经细胞分化，探讨丝素材料对其生长、黏附、分化等情况的影响。将小鼠ＥＳ细胞悬 浮培养４ｄ得到的拟胚体（ＥＢｓ）分别接种到经丝素膜和明胶包被的培养皿上进行诱导，比较不同 材料上ＥＢｓ的贴壁率及向神经元分化的比率。结果表明ＥＢｓ在明胶和柞蚕丝素蛋白膜（ＴＳＦ）上 贴壁较快，平均贴壁率为９０．３％和８４．４％，在桑蚕丝素蛋白膜（ＳＦ）上贴壁较慢，贴壁率低，仅为 ３８．５％，同时三者神经元的分化比率均能达到４０％以上，无明显差异。以上实验显示ＴＳＦ有望成 为小鼠ＥＳ细胞向神经细胞分化的支架材料。 关键词　胚胎干细胞　丝素　神经细胞 中图分类号　Ｑ８１９ 　　神经系统疾病严重危害着人类的健康，除了常规 性材料，有着很多优异的条件：可被加工成各种形态， 药物治疗之外，细胞替代性治疗已经成为生物医学研 如丝素膜、丝素纤维、水凝胶、多孔海绵等；有良好的生 究的热点［１］。所谓细胞替代性治疗，即用体外培养所 物相容性，无毒，无刺激性；在体内会被缓慢吸收降解； 获得的细胞进行移植，从而替代患者体内已经丧失功 可进行特定基团修饰、改性，还有望负载与干细胞增 ［２］ 殖、分化有关的特定因子或诱导剂。 能的细胞，以达到缓解症状甚至治愈疾病的目的 。 用于移植的神经细胞的来源是神经退行性疾病细胞替 　　本实验以小鼠ＥＳ细胞为种子细胞，使用改良的 代性治疗研究的一个重点，理想的供体细胞应该能够 ４／４＋ＲＡ诱导方案，将 ＥＳ细胞直接在丝素材料上向 进行大量扩增，具有特定的生物学功能，进入体内后能 神经细胞分化，探讨丝素材料对其生长、黏附、分化等 ［３，４］ 情况的影响，可为将来 ＥＳ细胞与具有３Ｄ结构并经过 够发挥相应的生理作用 。胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＥＳｃｅｌｌｓ）自我更新的特点，使其能在体外保 修饰、改性及负载诱导剂的丝素材料结合，控制其分化 持未分化的状态进行长时间的培养，从而获得大量的 为特定的神经细胞，最终用于神经系统退行性疾病的 细胞，而且在一定条件下，ＥＳ细胞可向多方向或单方向 临床治疗提供实验依据。 诱导分化。因此，ＥＳ细胞向神经方向诱导分化使其有 １　材料与方法 望成为神经移植的一种无限的细胞来源。 　　丝素蛋白材料作为临床修复和组织工程支架及改 １．１　材　料 　　ＤＭＥＭ（高糖）培养液、胎牛血清（ＦＢＳ）、新生小牛 收稿日期：２００８０７０８　　修回日期：２００８０８２７  国 家 自然 科 学 基 金 、国 家 “９７３”计 划 血清（ＮＣＳ）和非必需氨基酸（ＮＥＡＡ）购自Ｇｉｂｃｏ公司， ２００５ＣＢ６２３９０６）、江苏省高校 自然科学重大基础研究项 目 （ 胰蛋白酶（Ｔｒｙｐｓｉｎ）、巯基乙醇、丙酮酸钠、维甲酸 （ β ０６ＫＪＡ１８０２５）资助项目 通讯作者，电子信箱：ｈｚｈａｎｇ＠ｓｕｄａ．