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T淋巴细胞转化试验介绍 (T lymphocyte transformation test) 实验目的和要求 掌握T淋巴细胞转化实验的原理; 掌握细胞计数的方法。 熟悉能引起T淋巴细胞发生转化 的常用抗原性物质及其特点; T淋巴细胞与许多特异或非特异抗原在体外共同培养时，细胞的代谢和形态可以发生一系列的变化: 细胞形态向淋巴母细胞的转化。 电荷的改变、 细胞内蛋白质和核酸合成的增加、 实 验 原 理 淋巴母细胞转化过程示意图 未转化细胞 过渡态细胞 淋巴母细胞 实 验 方 案 细胞培养:外周血分离的单个核细胞与 植物血凝素(PHA)混合体外培养3天。 观察细胞形态变化:部分T细胞转化为淋巴 母细胞，部分可见核有丝分裂现象。 判定结果 实 验 材 料 肝素抗凝血 Hank‘s液 淋巴细胞分层液 PHA 细胞计数板 显微镜 操 作 步 骤 淋巴细胞的分离 用Hank’s液配成1×106细胞/ml的淋巴细胞悬液。 加PHA 5ug/ml 分别加入24孔细胞培养板，培养72小时 离心：1000rpm 10分钟 弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液 滴片