杭州开泰生物去核糖体试剂盒说明书.docxVIP

公司地址：杭州市西湖区青蓝科创园C座3号楼6楼 联系电话：0571 PAGE2 / NUMPAGES4 rRNA-off RNAseq Library Prep Kit ( human/mouse/rat) AT4204-01/02/03 使用说明书 产品简介 rRNA-off RNAseq Library Prep Kit( human/mouse/rat)采用特殊设计的DNA探针与核糖体RNA（rRNA）杂交，随后利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA杂交链中的rRNA，从而去除人、小鼠、大鼠总RNA中的细胞质核糖体RNA（28S、18S、5.8S、5S）和线粒体内核糖体RNA（16S、 12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非编码RNA。 该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果，所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序，可显著提高测序结果中有效数据比例，纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。 试剂盒组成 产品成分 AT4204-01 （6次） AT4204-02 （24次） AT4204-03（96次） 保存条件 Ribo Hybridization Probe (H/M/R) 6 uL 24 uL 4×24 uL -20℃ 5×Hybridization Buffer 18 uL 72 uL 4×72 uL -20℃ Ribo RNase H 6 uL 24 uL 4×24 uL -20℃ 5×RNase H Buffer 24 uL 96 uL 4×96 uL -20℃ Ribo DNase I 6 uL 24 uL 4×24 uL -20℃ 10×DNase I Buffer 30 uL 120 uL 4×120 uL -20℃ RNase-Free ddH2O 1 mL 2×1 mL 8×1 mL -20℃ rRNA Primer Mix 12 uL 48 uL 4×48 uL -20℃ mRNA Primer Mix 12 uL 48 uL 4×48 uL -20℃ 注意事项 试验前请仔细阅读本说明书，注意每个组分的保存温度，确保实验顺利完成。 2. 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。 3. 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、离心管进行实验。 4. 实验开始前，请清洁操作台，建议使用RNA酶及DNA酶清除试剂处理台面，确保没有RNA酶和DNA酶的污染。  实验原理图 操作步骤 探针与rRNA杂交： 1. 在200 μl Nuclease-Free PCR管中，用RNase-Free ddH2O将100~1000 ng人/小鼠/大鼠的总RNA稀释至11 μl，冰上放置备用。 注意：总RNA样品中应无DNA、盐离子（例如Mg2+、胍盐）、有机试剂（例如酚、乙醇）残留，否则可能导致非预期的RNA降解或去除效率降低。 参照下表配制探针反应液： 组分名称 体积 5× Hybridization Buffer 3 uL Ribo Hybridization Probe (H/M/R) 1 uL Total 4 uL 3. 将步骤2的4 μl探针反应液加入到步骤1装有11 μl RNA样品的PCR管中，用移液器吸吹混匀10次。 4. 瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖99~105℃均可），按以下程序操作，总共耗时约20 min。 注意：必须慢速降温(每秒降温0.1℃)，使探针与rRNA充分杂交。 步骤 温度 时间 1 95 ℃ 2min 2 95 to 22 ℃ 0.1 ℃/sec 3 22 ℃ 5min hold 5. 瞬时离心，并置于冰上，立即进入下步操作。 二、Ribo RNase H消化rRNA 1. 参照下表在冰上配制Ribo RNase H反应液，并用移液器吸吹混匀10次。 组分名称 体积 5× RNase H Buffer 4 uL Ribo RNase H 1 uL Total 5 uL 2. 将5 μl Ribo RNase H反应液加入步骤一的产物中，构成20 μl反应体系，用移液器吸吹混匀10次。 3. 瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖40℃），37℃孵育30 min。 4. 瞬时离心，将样品置于冰上，立即进入下步操作。 三、Ribo DNase I消化探针 1. 参照下表在冰上配制Ribo DNase I反应液，并用移液器轻轻吸吹混匀10次。 组分名称 体积 RNase-Free ddH2O