杭州开泰生物 通用型基因组建库试剂盒说明书.docxVIP

公司地址：杭州市西湖区青蓝科创园C座3号楼6楼 联系电话：0571 PAGE2 / NUMPAGES4 Universal DNAseq Library Prep Kit AT4105-01/02/03 使用说明书 产品简介 Universal DNAseq Library Prep Kit是针对illumina测序平台开发的一款通用型DNA文库构建试剂盒。试剂盒极大的简化了DNA小片段文库构建过程，使用一步简单的酶促反应替代了传统DNA文库构建过程中的末端修复以及接头连接反应等步骤，显著缩短了文库构建的时间。仅需2.5h即可将1~50ng 片段化处理后的DNA构建成高质量的DNA文库。试剂盒操作简单，极大的避免了繁杂操作带来的误差，构建的文库均一性高。 试剂盒组成 产品成分 AT4105-01 （6次） AT4105-02 （24次） AT4105-03（96次） 保存条件 DNAseq BufferⅠ 42 uL 168 uL 672 uL -20℃ cfDNAseq EnzymeⅠ 15 uL 60 uL 144 uL -20℃ DNAseq BufferⅡ 175 uL 700 uL 3 mL -20℃ cfDNAseq EnzymeⅡ 6 uL 24 uL 96 uL -20℃ DNAseq ADT 12 uL 48 uL 192 uL -20℃ DNAseq PCR Buffer 60 uL 240 uL 960 uL -20℃ dNTP(2.5 mM) 24 uL 96 uL 384 uL -20℃ DNAseq Universal Primer 12 uL 48 uL 192 uL -20℃ DNAseq -PCR Enzyme 1.5 uL 5 uL 20 uL -20℃ 注意事项 试验前请仔细阅读本说明书，注意每个组分的保存温度，确保实验顺利完成。 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。 DNA浓度需使用Qubit测定，起始DNA量测定不准确，会影响文库得率； 实验所用磁珠应提前30分钟自4℃环境中取出，平衡至室温。所有磁珠操作均需置于室温。 80%乙醇需现配现用，用其清洗磁珠后，需清除干净，避免对后续反应产生影响。 需自备试剂和耗材 无水乙醇；NF-H2O；ATPure Plus beads（DNA片段分选纯化磁珠）或效果相同的纯化磁珠 200uL PCR管；1.5mL离心管；磁力架；  实验原理图 操作步骤 末端修复、3端加A： 在新的PCR管中配制如下反应体系： DNA样品(1~50ng) X uL DNAseq BufferⅠ 7.0 uL DNAseq EnzymeⅠ 2.5 uL NF-H2O (40.5-X) uL 总体积 50.0 uL 注：DNAseq BufferⅠ和DNAseq EnzymeⅠ可配成master mix 移液器轻轻吹打20次充分混匀，37°C反应20min，72°C反应20min； 连接接头 在上一步的PCR管中加入以下试剂： 上一步反应产物 50.0 uL DNAseq BufferⅡ 27.0 uL DNAseq EnzymeⅡ 1.0 uL DNAseq ADT 2.0 uL 总体积 80.0 uL 注：DNAseq BufferⅡ、DNAseq EnzymeⅡ和DNAseq ADT可配成master mix 移液器轻轻吹打20次充分混匀，20°C反应15min，65°C反应10min； 纯化连接产物 用磁珠纯化连接产物，步骤如下： 将室温放置的30min后的ATPure Plus beads涡旋震荡混匀，并吸取64 uL至80 uL连接产物中，移液器轻轻吹打10次充分混匀，转移混和样本至新的1.5 mL离心管中，室温孵育5分钟。 将反应管短暂离心并置于磁力架上，放置5min，待溶液澄清，移除上清。 保持离心管始终处于磁力架中，加入200 uL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30秒后移除上清。 保持离心管始终处于磁力架中，加入200 uL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，瞬时离心，将管壁液体甩至管底，室温孵育30秒后除尽上清。 保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥5min。 将离心管从磁力架中取出，加入35uL NF-H2O洗脱。涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀。 将反应管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清吸取33.8uL上清至200uL PCR管中，待用。  PCR扩增： 在新的PCR管中配制如