Tn5-DNA建库试剂盒说明书（适用于Proton平台）.docx

公司地址：杭州市西湖区青蓝科创园C座3号楼6楼 联系电话：0571 PAGE4 / NUMPAGES4 Tn5-DNAseq Library Prep Kit （适用于Proton平台） AT4102-01/02/03 使用说明书 产品简介 Tn5-DNAseq Library Prep Kit（适用于Proton平台）是针对Proton测序平台开发的DNA文库构建试剂盒。试剂盒极大的简化了DNA小片段文库构建过程，使用一步简单的酶促反应替代了传统DNA文库构建过程中的片段化、末端修复以及接头连接反应等步骤，显著缩短了文库构建的时间。仅需2.5h即可将5ng/50ng DNA构建成高质量的DNA文库。试剂盒操作简单，极大的避免了繁杂操作带来的误差，构建的文库均一性高。 试剂盒组成 产品成分 AT4102-01 （6次） AT4102-02 （24次） AT4102-03（96次） 保存条件 BOX1 TnZ-IP01至TnZ-IP12 各1 uL 各4 uL 各16 uL -20℃ BOX2 Tn5-Frag Buffer 12 uL 48 uL 192 uL -20℃ Stop Solution 60 uL 240 uL 960 uL 4℃ Tn5-PCR Buffer 60 uL 240 uL 960 uL -20℃ dNTP(2.5 mM) 25 uL 100 uL 400 uL -20℃ Tn5-IP-Primer1 6 uL 24 uL 96 uL -20℃ Tn5-IP-Primer2 6 uL 24 uL 96 uL -20℃ Tn5-PCR Enzyme 1.5 uL 5 uL 20 uL -20℃ 注意事项 试验前请仔细阅读本说明书，注意每个组分的保存温度，确保实验顺利完成。 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。 DNA浓度需使用Qubit测定，起始DNA量测定不准确，会影响文库得率； 实验所用磁珠应提前30分钟自4℃环境中取出，平衡至室温。所有磁珠操作均需置于室温。 Stop Solution在使用前，请确保其回复室温，如有沉淀析出，请放置37℃加热混匀，使沉淀溶解。 80%乙醇需现配现用，用其清洗磁珠后，需清除干净，避免对后续反应产生影响。 需自备试剂和耗材 无水乙醇；NF-H2O；ATPure Plus beads（DNA片段分选纯化磁珠）或效果相同的纯化磁珠 200uL PCR管；1.5mL离心管；磁力架；  实验原理图 操作步骤 样本片段化反应： 1. 在新的PCR管中配制如下反应体系： DNA样品(5ng/50ng) X uL Tn5-Frag Buffer 2.0 uL TnZ-IP01* 2.0 uL NF-H2O (6-X) uL 总体积 10.0 uL * TnZ-IP01的index序列为CTAAGGTAAC，在使用时，请先使用移液器轻轻吹打，混合均匀，然后每个样本单独加入。 移液器轻轻吹打20次充分混匀，55°C反应15分钟； 反应结束后加入10uL Stop Solution并且充分混匀；  2. 用磁珠纯化片段化产物，步骤如下： 将室温放置的30min后的ATPure Plus beads涡旋震荡混匀，并吸取20 uL至20 uL片段化产物中，移液器轻轻吹打10次充分混匀，转移混和样本至新的1.5 mL离心管中，室温孵育5分钟。 将反应管短暂离心并置于磁力架上，放置5min，待溶液澄清，移除上清。 保持离心管始终处于磁力架中，加入200 uL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30秒后移除上清。 重复步骤3，总计漂洗两次。 保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥5min。 将离心管从磁力架中取出，加入35uL NF-H2O洗脱。涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀。 将反应管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清吸取33.8uL上清至200uL PCR管中，待用。 PCR扩增： 在新的PCR管中配制如下反应： Recovered DNA Fragment 33.8 uL Tn5-PCR Buffer 10.0 uL dNTP(2.5 mM) 4.0 uL Tn5-IP-Primer1 1.0 uL Tn5-IP-Primer2 1.0 uL Tn5-PCR Enzyme 0.2 uL 总体积 50.0 uL 充分混匀后在PCR仪中，进行如下反应： 温度 时间 循环数 72℃ 3min 95℃ 30s 95℃ 15s n* C