杭州开泰生物 小RNA建库试剂盒说明书.docxVIP

公司地址：杭州市西湖区青蓝科创园C座3号楼6楼 联系电话：0571 PAGE2 / NUMPAGES6 SmallRNA Library Prep Kit AT4203-01/ 02/03 使用说明书 产品简介 SmallRNA Library Prep Kit适用于构建illumina测序平台的MicroRNA文库；试剂盒操作简单，建库过程只需进行移液操作，无需纯化转管。极大的避免了操作带来的误差，构建的文库均一性高。 试剂盒组成 产品成分 AT4203-01 （6次） AT4203- 02 （24次） AT4203-03 （96次） 保存条件 Small RNA 3 ADT 4 uL 15 uL 60 uL -20℃ Small RNA 5 ADT 4 uL 15 uL 60 uL -20℃ Glycogen 6 uL 24 uL 96 uL -20℃ PAGE Elution Buffer 1.5 mL 6 mL 24 mL 4℃ Small RNA Ligase 1 1.5 uL 6 uL 24 uL -20℃ RNA Ligation Buffer 1 5.5 uL 22 uL 88 uL -20℃ Ligation Enhancer 7.5 uL 30 uL 120 uL -20℃ Small RNA Ligase 2 3 uL 12 uL 48 uL -20℃ RNA Ligation Buffer 2 5 uL 20 uL 80 uL -20℃ Small RNA RT Primer 3 uL 12 uL 48 uL -20℃ Small RNA RT buffer 25 uL 100 uL 400 uL -20℃ Small RNA RT Enzyme 3 uL 12 uL 48 uL -20℃ RNase Inhibitor 6 uL 24 uL 96 uL -20℃ PCR Master Mix 37.5 uL 150 uL 600 uL -20℃ Small RNA Universal Primer 3 uL 12 uL 48 uL -20℃ 注意事项 试验前请仔细阅读本说明书，注意每个组分的保存温度，确保实验顺利完成。 收到试剂盒后，请将PAGE Elution Buffer 保存至4℃。 未保证连接效率，请尽量避免Small RNA 3 ADT和Small RNA 5 ADT的反复冻融，建议分装多管保存。 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。 请确保实验所用RNA样本质量较好，浓度在250ng/uL以上。 文库割胶回收时，所有用具均需保持干净，防止样本之间的交叉污染。 需自备试剂和耗材 无水乙醇；Nuclease-Free Water；丙烯酰胺凝胶电泳试剂及耗材；20bp Marker（Takara，3420A）； 核酸染料； Spin-X Centrifuge Tube (Corning，8162)；200uL PCR管；500uL PCR管; 1.5mL离心管; 2mL离心管 实验原理图 操作步骤 Small RNA 3 ADT接头连接： 在新的PCR管中配制如下反应体系： Total RNA (1μg) x uL Small RNA 3 ADT 1.0 uL Nuclease-Free Water (4.0-x)uL Total 5.0 uL 充分混匀后，在PCR仪中70℃变性2min。反应结束后取出，迅速放在冰上2min，立即进行下游操作。  在样本变性PCR管中，加入以下反应体系： RNA Ligation Buffer 1 1.8 uL RNase Inhibitor 0.5 uL Small RNA Ligase 1 0.5 uL Total 7.8 uL 充分混匀后，每个样本管再加入2.2uL的Ligation Enhancer Mix，使用移液器充分混匀后，在PCR仪中37℃反应2h。反应结束后取出，放在冰上，立即进行下游实验。 注意：Ligation Enhancer Mix非常粘稠，需先将其他试剂加入样本管充分混匀，再加入Ligation Enhancer Mix充分混匀。 RT引物结合： 在上游反应的PCR管中，加入1uL的Small RNA RT Primer，充分混匀后，在PCR仪中，进行如下反应： 温度 时间 75℃ 5min 37℃ 30min 25℃ 15min 结束后取出，放在冰上，立即进行下游实验。 Small