猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的优化建立及初步应用.PDFVIP

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2019-01-14 发布于天津
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猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的优化建立及初步应用.PDF

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猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的优化建立及初步应用

56 2010 4( ) 119 PCR 1 2 1 1 1 曾强 , 陈响坤 , 顾万军, 黄良宗 , 白挨泉 ( 1. , 528231; 2. , 528231) + : S852. 65 9. 1 : B : 1004-7034( 20 10) 04- 0119- 03 : 猪伪狂犬病病毒; PCR检测方法; 初步应用 : 为了建敏感性高特异性高重复性好的猪伪狂犬病病原的 PCR 检测方法, 试验根据初步建的猪伪狂犬病病毒( PRV)聚合酶链反应( polymer se ch in re ction, PCR) 检测方法, 对其 PCR反应条件进行了优化, 并对 25 个猪场 210份可疑猪伪狂犬病病毒感染的病料进行了检测结果表明: 25 个猪场有 24 个检出 PR 阳性, 猪场检出率为 96%; 猪伪狂犬病病毒总体感染阳性率达 60. 5% ( 127/210), 感染阳性率最高为 100%, 最低为 0 ( PRV ) , 1. 2 ( polymer se ch in re ction, PCR ) 1. 2. 1 DNASIS , gD, Prmi - er Prem ier 3. 0 , 18 ~ 25 bp, PCR, 200~ 700 bp PR 1 5c- , c cgg gg cg gctggggct - 3c, PR2 5c- gtcc cgccccgc- 1 cgcttg gct - 3c, 217 bp 1. 1 1. 1. 1 ( B rth 1. 2. 2 DNA k61), 100 LL() ; 20 mg, 500 LL DNA , , EP , 1 LL K ( 20 mg/mL), 56 e 4 h; 98 e 5 m in K, 5 m in; - , 1. 1. 2 TE ( pH 8. 0 ): 10 mmol/L 1 m in, 10 m in 12 000 g Tris- C l( pH 8. 0), 1 mmol/L EDTA ( pH 10 m in ; , - ; , 8. 0), 50 @ TAE 242 g, 57. 1 mL, 0. 5 mol/L , , 10 m in EDTA ( pH 8. 0) 100 mL, 1 000 mL 12 000 g 10 m in ; , 75% DNA : 0. 0 1 mol/L Tris- HC l 1 mL, 7 500 g 10 m in; , 5 m in, ( pH 8. 0), 1 mmol/L EDTA, 100 mmol/L N Cl, 20 LL DNA 0. 5% SDSBlend T q, TOYOBO ; dNTPs 1. 2. 3 PC