江西猪源产中esbls etec流行及质粒相关性研究.docxVIP

目 目 录 lIIIIII I II II I IIHIIII IIl 目 录 Y31 12065 摘要 ．．I Abstract ． ．．．． ．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．． ． ．． ．．． ． ．．．． ． ．．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．． ．II 第一章文献综述 1 1大肠杆菌 ．1 1．1大肠杆菌概述 1 1．2大肠杆菌耐药性 1 1．3大肠杆菌耐药机制 ．2 2．ETEC ．．．．．．．．． ．．．．．． ． ． ．．． ．．． ．．．． ．．．2 3．ESBLs ．．3 3．1定义 3 3．2来源及分类 3 3．3流行情况 6 4．传播机制 7 5．ESBLs的检测方法 ．7 5．1常见表型鉴定方法 7 5．2可鉴定ESBLs亚型的常见分子生物学方法 ．．8 6选题目的及意义 ．．． 8 第二章ETEC的分离鉴定及药敏试验 1 O 1材料 10 1．1菌株 10 1．2样品采集 ．10 I．3培养基 ．10 1．4药敏纸片 ．10 1．5主要试剂 ．10 1．6主要仪器设备 ，1 1 2 方法 11 2．1大肠杆菌分离及保存 ．11 2．2 ETEC鉴定 1 1 2．3 ETEC药敏试验 12 3． 结果 12 3．1大肠杆菌分离鉴定结果 ．12 3．2 ETEC分离鉴定结果 13 3．3 ETEC药敏试验结果 14 3．4 ETEC对不同抗生素敏感性结果 18 3．5 ETEC多重耐药结果 21 万方数据 —————————————————————————————————』L—』熏————————～3．6 —————————————————————————————————』L—』熏————————～ 3．6 ETEC交叉耐药情况 24 4讨论 ．26 4．1 ETEC耐药 26 4．2 ETEC多重耐药 27 4．3 ETEC交叉耐药 28 5 小结 ．28 第三章产ESBLs ETEC鉴定及耐药性研究 ．．30 l材料 30 1．1菌株 ．30 1．2培养基 ．30 1．3药敏纸片 ．30 1．4主要试剂 ．30 1。5主要仪器设备 ．30 2方法 ．3 1 2．11 x106CFU／mL浓度ETEC制备 3 1 2．2产ESBLs ETEC表型鉴定 ．3 l 2．3 ESBLs基因检测 31 2．4 ESBLs ETEC进化分群对比研究 3 1 3结果 ．32 3．1产ESBLs ETEC鉴定结果 ．32 3．2 ETEC ESBLs基因分型结果 33 3．3产ESBLs ETEC进化分群结果 ．34 3．4产ESBLs ETEC和非产ESBLs ETEC耐药性结果 36 3．5 ETEC进化分群和耐药关联性 39 4讨论 ．42 4．I ESBLs基因型检出率 一42 4．2产ESBLs ETEC进化分群 ．43 4．2产ESBLs ETEC耐药性 ．43 5小结 44 第四章ESBLs阳性质粒介导ETEC耐药性水平传播机制的研究 45 1材料 ．45 1．1菌株 45 1．2培养基 ．45 1．3抗生素和药敏纸片 ．45 1．4主要试剂 ．45 1．5主要仪器设备 ．46 2方法 ．46 万方数据 目 目 录 2．1质粒提取及电泳 ．46 2．2质粒分型 ．46 2-3 ESBLs阳性质粒转化及转化子药敏试验 一48 2．4磷霉素、呋喃妥因、替加环素药敏试验 ．48 3 结果 ．48 3．1产ESBLs ETEC和非产ESBLs ETEC质粒提取结果 48 3．2质粒分型结果 ．49 3．3质粒转化结果 ．51 3．4磷霉素、呋喃妥因、替加环素药敏试验结果 ．52 I讨论 ．53 4．1 ETEC质粒图谱 53 4．2质粒分型 ．53 4．3 ESBLs阳性质粒转化子 ．．53 4．4磷霉素、呋喃妥因和替加环素耐药性 ．54 5 小结 ．54 全文总结 ．．55 参考文献 ．．56 致谢 ．．64 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 近年来，产超广谱B一内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases，ESBLs)在猪 源大肠杆菌中广泛流行，赋予细菌多重耐药性，给耐药性大肠杆菌防控工作带来巨大 挑战。产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是养猪业最常见的致病性大肠杆菌之一。江西是 我国养猪大省，了解ESBLs在江西猪源ETEC的流行及其介导的耐药具有重大意义。 本研究以从江西规模化养猪场腹泻仔猪直肠拭子中分离的146株大肠杆菌为受 试菌。首先采用PCR和纸片法对ETEC和产ESBLs ETEC进行鉴定，并进行药敏试 验。结果：1．ETEC检出率为65．07％(95／146)，产ES