江西省猪群中三种小dn义a病毒的分子流行病学分析分析.docx

独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自 独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自 己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人 发表或撰写过的研究成果，也不包含在江西农业大学或其它教育机构获得学位或证书而使用过的 材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有 严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名．／芝辔三易色L 论文使用授权的说明 本人完全了解江西农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件， 允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制 手段保存论文。 保密，在——年后解密可适用本授权书。口 不保秘，本学位论文属于不保密。 口 札吨(请在方框内打“、／”) 学位论文作者亲笔签 徊竺。笸：廛 指导教师亲笔签名： 阜啦骑期：f靼扭瓤 考盈望．亟：!刍 万方数据 目录目 目录 目 录 摘要 I ABSTRACT ．．III 缩略词表 一V 上篇文献综述 1 第一章圆环病毒2型分子生物学研究进展 ．1 1病原学及分子流行病学研究 ．1 1．1病原学 l 1．2 PCV流行病学调查 一5 2 PCV2致病机理 ．．7 2．1 PCVl和PCV2的分子生物学差异分析 7 2．2 PMWS的病原学分析 ．．8 2．3 PMWS致病机理的细胞及分子免疫学分析 ．．8 3 PCV2诊断技术研究进展 一8 3．1抗原检测 9 3．2抗体检测 ．10 4 PCV2疫苗的研究进展 10 第二章猪输血传播病毒研究进展 ．11 1研究概述 11 2 TTSuV的研究现状 ．．1 1 2．1 TTSuV基因组 11 2．2 TTSuV流行病学调查 12 2．3 TTSuV感染特点 12 2．4 TTSuV传播途径 13 2．5 TTSuV致病性研究 13 2．6 TTSuV检测方法 ．13 第三章猪博卡病毒的研究进展 ．14 1病原学发展简介 14 2分子特征 14 3流行病学研究 1 5 3．1分布特点 ．15 3．2流行感染特点 ．1 5 万方数据 目录3．3分子流行病学研究方法 目录 3．3分子流行病学研究方法 ．16 4研究展望 16 第四章环介导等温扩增技术概述 ．17 1 LAMP扩增原理 17 2 LAMP的特点 ．19 2．1快速性和高效性 ．19 2．2灵敏度高 ．19 2．3特异性高 ．19 2．4检测方便 ．．19 2．5操作简单 ．1 9 2．6 R，r-LAMP 19 3 LAMP的不足 19 4 LAMP技术的应用 19 第五章PCV2和PBOV两重PCR检测方法的建立与临床样品的检测分 191‘ 20 1材料与方法 20 1．1实验材料 20 1．2主要仪器设备 20 1．3临床样品及病料的采集 20 1．4引物合成 2l 1．5病料预处理 21 1．6 DNA的提取 21 1．7扩增目的片段 21 1．8产物电泳 22 1．9胶回收 22 1．10 T_A克隆目的片段 22 1．11重组质粒的PCR鉴定 ．22 1．12扩增片段测序分析 ．．22 1_13优化单项PCR 一23 1．14多重PCR条件优化 ．23 2结果 ．23 2．1单项PCR引物浓度及退火温度的确定 23 2．2多重PCR反应条件的优化及确定 28 2．3 PCV2及PBoV江西地区的流行病学调查 30 万方数据 目录2．4产物序列分析 目录 2．4产物序列分析 33 3小结与讨论 34 第六章TTSUVl和TTSUV2多重套式PCR检测的建立及临床样品检测 乡子析 ．．36 1材料与方法 36 1．1实验材料 ．36 1．2主要仪器设备 ．36 1．3引物合成 ．36 1．4病料样品的预处理 ．36 1．5 DNA的提取 36 1．6目的片段的PCR扩增 37 1．7胶回收 ．37 1．8 T_A克隆目的片段 ．37 1．9 PCR鉴定重组质粒 37 1．10 单项套式PCR条件的优化 37 1．11 建立多重套式PCR检测方法 38 2结果 38 2．1单项套式PCR引物浓度及退火温度的确定 38 2．2多重PCR反应条件的优化及最终反应条件 43 2．3 TTSuVl、TTSuV2及PCV2江西地区的流行病学调查 44 2．4多重套式PCR产物的序列分析 45 3小结与讨论 47 第七章猪圆环病毒2型江西分离株全基因组的克隆、测序及分析 ．49 1材料与方法 49 1．1材料 ．．49 1．2方法 ．．49 2结果与分析 5 1 2．1 PCV2全基因组临床样品的PC