第三章高效液相色谱.PDFVIP

第三章 高效液相色谱 本章地位：本章是仪器分析传统分类中的色谱分析部分，主要分析对象是有机 化合物，该方法的使用范围广，实用价值强。 本章内容：本章主要介绍了高效液相色谱的特点、应用范围；色谱仪的主要部 件基本流程；常用检测器及液相色谱的分类及色谱分离条件的选择 等。 讲解思路：首先介绍高效液相色谱和气相色谱的特点比较、仪器组成；重点 介绍高效液相色谱柱的各种固定相及流动相的选择、分离原理。重 点讲解流动相在进行梯度洗脱中对色谱峰分析的影响，以及影响色 谱峰分离的因素，液相色谱条件的选择。 课时分配：3学时 第一节 高效液相色谱法的特点 第二节 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 第三节 高效液相色谱法的类型及分离原理 一、教学目的 1. 掌握高效液相色谱法的特点 2. 掌握影响色谱峰扩展及色谱分离的因素； 3. 了解高效液相色谱法的类型和各类型的原理及应用； 二、重点：影响色谱峰扩展及色谱分离的因素、高效液相色谱法的类型 三、难点：影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 四、教学方法与手段：讲授，讨论。通过形象比喻、提问式、启发式、举例 式和动画放映等方式化解难点。 五、教学进程 简单复习气相色谱的特点组成应用后引出液相色谱。 第一节 高效液相色谱法的特点 一、概述 液相色谱法是指流动相为液体的技术。早期的液相色谱（经典液相色谱）是 将小体积的试液注入色谱柱上部，然后用洗脱液（流动相）洗脱。这种经典色谱 法，流动相依靠自身的重力穿过色谱柱，柱效差(固定相颗粒不能太小)，分离时 间很长。 70年代初期发展起来的高效液相色谱法，克服了经典液相色谱法柱效低， 分离时间很长的缺点。成为一种高效、快速的分离技术。高效液相色谱法是在经 典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最 7 高输送压力可达4.9×10Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成， 从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后 连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 二、特点 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受 到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～ 350×10Pa。5 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了 -11 分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10 g。另外，用样量小，一般几个微 升。 5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有 分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制， 沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液 相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。 对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物 质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分 离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用 液相色谱分析的约占70～80%。 第二节 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 一、液相色谱速率理论—影响色谱峰扩展因素 1. He 1. He 11.. 涡流扩散项HHee A=2λd p 其含义与其相色谱法相同。 2 H 2 H 22．纵向扩散项HHd d dd