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- 2019-01-11 发布于福建
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实验基是本技术
细胞计数 根据细胞生长的恃点,传代方法有3种: 1.悬浮生长细胞传代 离心法传代:离心(1000转/分)去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。 直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除l/2一2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 2.半悬浮生长细胞传代(Hela细胞) 此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹 打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。 3.贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。 贴壁生长细胞传代方法 1 吸光培养瓶中的培养液 2 加入1-2 ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准) 静置2-10 min(显微镜下动态监测)。 3 吸去胰蛋白酶液,加入培养液。 4 用吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,形成细胞悬液。 5 离心,细胞沉淀用培养液制成悬液。 5 吸取1/10—1/40细胞悬液,接种于新的培养瓶内。 6 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 7 将后者放入培养箱中培养。 任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成,从形态上区别死、活细胞是困难的。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和
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