基因芯片制作中寡核苷酸或dna的共价固定-材料科学与工程专业论文.docxVIP

基因芯片制作中寡核苷酸或DNA的共价固定摘要 基因芯片制作中寡核苷酸或DNA的共价固定 摘要 寡核苷酸或基因片段在适当基片表面的固定是基因芯片制作的起始步骤，如何 实现寡核苷酸或DNA有效的共价固定是基因芯片研究的热点之一。本文介绍了寡核 苷酸或DNA在经过适当处理的玻璃片、PMMA或Ps等高分子薄片上共价固定的研 究结果。 1 对比普通玻璃和石英玻璃载体，发现石英玻璃在荧光检测下背景吸收弱并且单 一，适合于用荧光扫描法检测；石英玻璃片与氨基硅烷化试剂反应在其表面连上氨 丁基四乙氧基硅烷基，继而与异硫氰酸酯反应后能与5’端或3’端氨基修饰的寡核苷 酸反应，适合于寡核苷酸或DNA的共价固定；将氨基硅炕化的石英玻璃片牵进口的 玻璃芯片直接和荧光修饰的l，4．苯二异硫氰酸酯(PDITC)作用，经荧光扫描分析， 证明自制芯片的固定效果达到甚至超过国际同类芯片的水平。 2 PMMA薄片水解后以亚氨基二乙酸处理，能明显增加表面羧基密度，表明在 PMMA表面可能形成了羧基密度戍倍增加的树状体结构，PMMA薄片表面经过以上 两步修饰后，在EDAC存在下，可有效地共价固定荧光标记的寡核苷酸。如将PMMA 基片先经微加工增加其比表面积，再按上述过程进行表面修饰，可望进一步提高对 寡核苷酸或DNA固定的密度。但所形成的树状体的结构有待进一步确证． 3 通过两条合成路线对聚笨乙烯进行功能基化，经多步反应分别得到了醛基活化 的聚苯乙烯和琥珀酰亚胺酯活化的聚苯乙烯。设想将合成的目标产物涂附在聚苯乙 烯片基上可以共价固定寡核苷酸或DNA探针，但实验证明要使这些衍生化的聚苯乙 烯在聚苯乙烯基片上形成均一、透明、牢固的薄膜非常困难。如何将聚苯乙烯进行 适当程度的衍生而达到以上成膜要求进而有效固定寡核苷酸还有待进一步研究。 关键词：基因芯片 寡核苷酸DNA 共份固定PMMA 聚苯乙烯 Studies Studies on the covalent immobilization of oligonucleotide or DNA onto solid substrates in the manufacture of DNA chips Abstract The immobilization of 01igonucleotides onto solid substrates plays all important role in the manufacturing of DNA chips．Our research aims at the modification ofthe solid substrates to get three dimensional DNA chip． Glass slides， polymethylmathacrylate(eMMA)and polystyrene slides were chosen as DNA chip substrates． After long—lasting experimentations，we have finally found quartz glass an excellent DNA chip substrate with very weak fluorescent background．The activation of the substrate surface was achieved by coupling a large munber of amino groups， then treated with phenylenediisothiocyanate in order to convert amino group to free isothiocyanate group．Amino modified oligonucleotide arrays call bind onto the surface of the activated chips．The slides exhibit good binding effect which is comparable to or even beRer than that from Colin Inc．(USA)，but cost much lower． In order to explore the possibility in manufacturing three-dimensional chips by micro．process，polymethylmathacrylate(PMMA)slides were chosen as the substrate· The PMMA chips，after surface hydroly