第九章 动物实验基本操作技术.pptVIP

第九章  动物实验基本操作技术 动物实验基本操作技术 动物实验的方法是各种各样的，如常用模型复制法、切开和分离法、切除和注入法、离体组织器官法等，在不同的研究领域有其不同的目的和应用，但是一些基本的操作技术方法是一样的。 如动物的抓取、固定、标号、脱毛、麻醉、给药、采血、采尿、处死等，对于实验研究者来说无论从事哪一类研究项目，都会不同程度的应用这些技术。 一、大、小鼠的抓取固定 二、豚鼠的抓取固定法 三、家兔的抓取固定法 一、大、小鼠的性别鉴定 一、大、小鼠 1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样） 2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应 二、豚鼠 老年豚鼠：牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。 年轻豚鼠：牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。同日龄雌性体重略高于雄性。 外部检查法 摸胎法 阴道检查法 直肠检查法 超声波检查法 孕酮含量测定法 青蛙试验 二、编号标记方法 实验动物分组后，为了区分、观察并记录每个个体的反应情况，必须给每只动物进行编号标记。 1．体表颜料着色法 一般对短期试验的白色动物可用颜料涂搽被毛的方法标记。常用的涂染化学药品有： 红色：0.5％中性红或品红溶液； 黄色：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸酒精饱和液； 咖啡色：2％硝酸银溶液； 黑色：煤焦油酒精溶液。 左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6， 2．个体耳号标记法 3. 个体断趾标记法 4. 耳号钳标记法 5. 挂牌法 采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。 1）采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜； 2）采血用具有采用部位一般需要进行消毒； 3）采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥； 4）若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。 一、实验动物的麻醉方法 （一）全身麻醉法 1、吸入法 （一）全身麻醉法 2、注射法 静脉注射、肌肉注射、腹腔注射 麻醉药： 巴比妥类药物、 氯胺酮、 乌拉坦、 水合氯醛 （二） 局部麻醉法 注射部位：皮肤、肌下组织、深层组织 1% 盐酸普鲁卡因 局部浸润麻醉 0.02～2％盐酸可卡因 表面麻醉 麻醉药物应用原则： 依据动物体重计算麻醉药物的剂量； 依据动物生命体征变化控制给药速度； 掌握宁少勿多、分阶段给药的方式； 麻醉时需注意保温。 （一）皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。 注射部位：狗、猫大腿外侧 兔背部/耳根部 豚鼠后大腿内侧/小腹部；大白鼠侧下腹部 （二）皮内注射 局部脱毛——消毒——绷紧皮肤——30度进针 挑起针头稍刺入可注射——皮肤表面鼓起一小皮丘。 （三）肌肉注射 （四）腹腔注射 用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推?0.3～0.5cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液， （五）静脉注射——注射时尽量使血管充盈 1．兔：兔耳缘静脉 先拔毛，手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈 固定：左手食指和中指夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及小指垫在下面 进针：6号针头从静脉的远端进针，移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，将药液注入 结束：然后拔出针头，用手压迫针眼片刻 2．小白鼠和大白鼠——尾静脉注射 固定动物（鼠筒或烧杯），露出尾巴，45～50℃温水浸润半分钟或酒精擦拭，血管充盈，表皮角质软化 固定：以左手食指和中指捏住鼠尾，无名指从下面托起，以大拇指和小指夹住尾巴的末梢 注射：进针，先缓注少量药液，无阻力 3．狗——前肢内侧皮下头静脉、后肢小隐静脉 侧卧固定，剪毛，用胶皮带扎紧静脉近端