蛋白样品制备全攻略.PDF

蛋白样品制备全攻略 双向电泳可不是一件容易的差事，花银子花时间不说，结果还很难重复。想要搞定双向电泳，关 键在于建立一套有效、可重复的样品制备方法。方法是多种多样的，不过都基本遵循以下的原则： 1. 样品缓冲液中离子浓度的控制 视，占了总蛋白的约 10-20%。这两种蛋白异 军突起，常常掩盖了其它类似大小的蛋白，使 2. 溶解包括疏水蛋白在内的所有蛋白质 我们无视低丰度蛋白的存在，也降低了双向电 3. 防止聚焦过程中已溶解蛋白质的聚焦和 泳的分辨率。因此，在分析目的蛋白之前，我 析出 们一定要先干掉白蛋白和 IgG 这两个家伙。 4. 防止样品制备过程中及其后蛋白样品的 样品中的核酸会对等电聚焦的结果产生干 酶或化学降解等的修饰反应 扰：DNA 复合物在变性条件下发生解离而使溶 5. 去除或完全降解核酸及其他干扰分子 液的粘稠度增加，可阻碍蛋白质进入 IPG 胶条， 并减慢蛋白质在胶条中的移动速度。DNA 也会 6. 去除高丰度或不相关的蛋白质，提高低 与样品中的某些蛋白质结合，出现人工假象和 丰度蛋白的浓度，使其达到检测要求 条纹。 提高分辨率和确保重复性是双向电泳实验 具体的解决方案如下： 最重要的两个目标。蛋白样品制备在实现这两 个目标的过程中起到了核心作用。Bio-Rad 公 去除盐分、去垢剂、脂类、酚类 司的 ReadyPrep 试剂盒通过试剂增溶或差异 ReadyPrep 2-D 净化试剂盒 溶解来减少脱尾或降低样品复杂性，从而成为 ReadyPrep 2-D 净化试剂盒可去除蛋白 用户可靠的实验工具。ReadyPrep 产品线包含 样品中的去垢剂、盐分、小肽、脂类和酚类化 一系列 2-D 样品制备试剂盒，不仅适用于通用 合物。这些物质会干扰双向电泳。本试剂盒含 样品（总蛋白）处理，而且可以将复杂样品按 有不受去垢剂、离液剂或其它实验中常用试剂 特定方法分级。处理通用样品的试剂盒包括总 干扰的沉淀试剂，可充分沉淀样品蛋白，并保 蛋白抽提和蛋白净化（clean-up ）。样品分级试 证了蛋白样品的回收效率和浓度。 剂盒可用来降低样品复杂程度，同时有助于低 丰度蛋白的富集和鉴定。这类试剂盒又分为两 去除白蛋白 种，一种是基于蛋白不同的亚细胞定位来分离， Aurum Affi–Gel 蓝胶小型试剂盒和层析 另一种是对细胞总蛋白进行分级，从而适合于 柱 总蛋白质组分析。 通过亲和层析，Affi–Gel 蓝胶能去除血清 从血清或血浆中提取的低丰