第五章 体内药物分析.pptVIP

备用图片 *：含过氧化物；?：肝脏毒性， 有致癌作用 Thank you very much! （十二）名词解释1 对照标准物质（reference standard）： 用于配制校正标样和QC样品的待测物的参比标准 在结构上可以是待测物本身， 也可以是其游离碱或酸， 盐或酯 常用的对照标准物质主要有三种来源： ①法定对照标准物质（如ChP标准品或对照品、USP标准品）； ②市售对照标准物质（来自于具有良好信誉的供应商）； ③分析实验室或科研机构自行合成和（或）纯化的具有一定纯度的化合物 生物基质（biological matrix）：生物来源的物质， 能以可重复的方式采集和处理；如血浆、血清、尿、粪、各种组织等 （十三）名词解释2 基质效应（matrix effect）： 样品中存在除待测物以外的其他干扰物质对响应造成的直接或间接的影响 校正标样（calibration standard）： 在空白生物基质中加入已知量待测物对照标准物质制成的样品 用于建立标准曲线， 计算质控（QC）样品和试验样品中待测物的浓度 质控样品（quality control sample）： 即QC样品， 在空白生物基质中加入已知量待测对照物标准物质制成的样品 用于监测生物分析方法的效能和评价每一分析批中试验样品分析结果的完整性和正确性 （十四）名词解释3 试验样品（study samples）是作为分析对象的体内样品 处理过的样品（processed sample）待测样品经过各步骤（如提取、纯化、浓缩等）处理制成的、直接用于仪器分析的试样 分析批（Analytical run/batch）包括试验样品、适当数目的校正标样和QC样品的一个完整系列。由于仪器性能的改善和自动进样器的使用，一天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以持续几天完成，但连续测量不宜超过3天 试验样品再分析（incurred sample reanalysis）分析一部分已测试验样品，来评价原来的试验样品测定的结果是否可以重现 第四节典型体内药物分析应用 1.LC-MS/MS测定人血浆中氨氯地平对映体及其药物动力学应用 2.替诺福韦双特戊酯的体内药动学及其对左卡尼汀血药浓度的影响 氨氯地平 新型二氢吡啶类长效钙通道阻滞药，临床上主要用于治疗高血压和心绞痛 氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故具有一对光学异构体R-（+）-氨氯地平与S-（-）-氨氯地平 仅S-（-）-氨氯地平具有血管扩张作用 因此需进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体选择性药动学研究 一、LC-MS/MS测定人血浆中氨氯地平对映体及其药物动力学应用 色谱条件 色谱柱Chiralcel OJ RH柱（150mm × 4.6mm， 3.5μm）；流动相乙腈-0.2%氨的水溶液 （80︰20，v/v）；流速1.0ml/min；进样10μl 质谱条件 离子化方式，电喷雾（ESI）离子源；电离模式，正离子；扫描方式，多反应监测（MRM）。氨氯地平和氨氯地平-d4（内标物）的母/子离子对的质荷比（m/z）分别为409.2→238.1和413.2→238.1 200μl血浆样品中加入一定量内标溶液混匀，再加入乙酸乙酯-正己烷（8︰2，v/v）溶液2.0ml 血浆样品处理 振荡2分钟 3000r/min离心5分钟 取有机层溶液1.8ml，40℃氮气吹干，加入500μl流动相复溶 方法学验证 选择性：在实验条件下两对映体色谱峰达基线分离，内源性物质不干扰测定 血浆中氨氯地平LC-MS/MS分析物（左）和内标物（右）的典型MRM色谱图 a.空白人血浆；b. 人血浆中加入内标物；c. 空白人血浆中加入定量下限浓度的分析物（0.10ng/ml）和内标物；d.其中一位受试者口服10mg氨氯地平片后8小时采集的试验样品 方法学验证 定量范围：氨氯地平单个对映体浓度在0.1～10ng/ml范围内，均有良好的线性响应（r＞0.995） 准确度和精密度：定量下限及低、中、高浓度质控样品（0.1、0.3、5.0和8.0ng/ml）的准确度在97.9%～103%之间，各项精密度实验结果的RSD均小于6.96% 提取回收率： R-（+）-氨氯地平的低、中、高浓度质控样品回收率分别为（78.64±3.93）%、（69.62±3.20）%和（76.53±2.39）% S-（-）-氨氯地平的低、中、高浓度质控样品回收率分别为（79.42±2.05）%、（79.33±2.80）%和（78.74±2.50）% 内标R-/S-氨氯地平-d4回收率分别为（70.51±5.62）%和（72.63±2.63） 样品稳定性：低、高质控样品分别在室温放置8小时，经过三次冻融循环，-20℃保存30天以及处理过的样品在自动进样器温度下放置4小时的稳