第9章+真核生物基因都表达的调控.ppt

核小体结构如图所示: 基因组序列的选择性扩增 1. dhfr 基因 氨甲喋呤（ methotrexate） 二氢叶酸还原酶(DHFR) 均染色区（homogeneously staining region, HSR） 双微体(double-minute chromosomes) 均染色区（homogeneously staining region, HSR） 双微体(double-minute chromosomes) 免疫球蛋白的重排 抗体有100万种以上，一种淋巴细胞只产生一种抗体 1.指令学说：上世纪40年代由Pauling提出 2.克隆选择学说：1957年 Burnet提出 3.体细胞重组学说：上世纪60年代提出， 1976年由利根川进（日本）证实。 产生抗体 B细胞 体液免疫 经法氏囊(Barsa of Fabricius) 细胞分裂 骨髓 经胸腺 调节免疫应答 T细胞 细胞免疫 杀伤抗原 1、染色质的状态 阻遏状态：DNA被压缩在细胞核中，基因处于非活性状态，组蛋白为染色质活性的阻遏蛋白； 活性状态：具有活性潜能的基因失去H1，处于染色质的伸展状态； 激活状态：顺式调控元件中结合了基础转录因子及激活因子等，活性染色质处于松弛状态。 染色质的占先模型提出：如在启动子上已形成了核小体，那么转录因子和RNA聚合酶是不能和启动子结合的；如转录因子和RNA聚合酶在启动子上已建立了稳定的起始复合体，那么组蛋白将被排除在外。 组蛋白的乙酰化和去乙酰化 组蛋白的乙酰化和基因表达的状态相关。高乙酰化是活性染色质的标志之一，低乙酰化常伴随着转录沉默。 HATs (histone acetytransferases)组蛋白乙酰化酶 HDACs (histone deacetylases) HATs有两组，一组为A组，和转录有关； 另一组是B组，和核小体装配有关。 乙酰化促进基因转录 组蛋白H4的去乙酰化是雌性哺乳动物一条X染色体失活的原因之一。 组蛋白乙酰化与转录起始复合体的装配 乙酰化导致组蛋白正电荷减少，削弱了它与DNA的结合能力，使核小体解聚； 阻止了核小体装配，使染色质处于松弛状态； 组蛋白去乙酰化与基因沉默 组蛋白去乙酰化可导致基因转录受抑制 ◆DNA甲基化的生物学效应 印记:来源于父母本的一对等位基因表达不同。如源于父本的IGF-Ⅱ (胰岛素样生长因子Ⅱ)基因可表达，而源于母本的则不能表达。此是由于卵母细胞中的IGF-Ⅱ 已被甲基化，而精子中的IGF-Ⅱ未被甲基化，所以这一对等位基因在合子中表现不同。 亲本的IGF-Ⅱ等位 基因在早期胚中被差异甲基化，在成体形成配子时仍保留原甲基化的模式。 抑癌基因甲基化 不表达 2、反式作用因子 三个功能结构域：DNA结合结构域；转录激活结构域；调控因子的激活结构域（蛋白质与蛋白质结合） 能识别并结合顺式作用元件(cis-acting element) 正调控与负调控 是最简单的结构基序之一，该结构域长约20个aa，主要是两个α-螺旋区和将其隔开的β转角。C端螺旋被称为识别螺旋区，可与DNA大沟中的碱基直接接触。另一端螺旋无特异性,与DNA骨架接触 一段肽链上每隔7个aa出现一个leu，借助于leu侧链的疏水相互作用而形成同向平行的拉链状，进而形成二聚体结构。 由肽链氨基端20～30个富含赖氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）的结构域与DNA结合。 蛋白质与蛋白质结合结构域 一般由20－100aa残基组成 据结构特点分为： 酸性氨基酸聚集的结构域：负电荷高度集中，呈酸性；有一个两亲性螺旋，螺旋一侧富含酸性氨基酸，另一侧为疏水性残基 富含谷氨酰胺的结构域：富含谷氨酰胺 富含脯氨酸的结构域： 蛋白质调节因子功能的鉴别方法 蛋白质与DNA的结合能力 方法：电泳迁移后滞分析（EMSA） 足迹法分析DNA上蛋白质结合位点 蛋白质－蛋白质互作的分析 酵母双杂交试验 2、RNA干扰（RNA inference） Control o