抗流感病毒单克隆抗体的制备达与鉴定.pptVIP

3.2 关于抗NP蛋白单抗 为了证实所产生的单克隆抗体确实是针对病毒NP蛋白保守性位点的，采用了多株禽流感病毒和表达的NP蛋白正筛选、阴性尿囊液及破碎的菌体负筛选的方法，筛选到了6株针对禽流感病毒NP蛋白保守性位点的单抗，其中2株是高效价的单抗。 本实验所制备的2株高效价的抗NP蛋白的单抗用鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒、传染性喉气管炎病毒检测，均无交叉反应，具有很好的特异性。 3.2 关于抗NP蛋白单抗 本研究所获得的针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体为禽流感的诊断，甚至是A型流感病毒的诊断提供了高质量的试剂。 本实验室已在此基础上进行了双夹心ELISA方法检测不同亚型的禽流感病毒的研究，并已经研制出了相关试剂盒应用于临床检测，为实现实验室诊断的标准化、开展流行病学调查研究奠定了很好的基础 。 3.2 关于抗NP蛋白单抗 3.3 关于抗H3N8 HA蛋白单抗 本研究所制备的3株高效价的抗HA蛋白的单抗用H1、H3、H5、H9亚型禽流感病毒及鸡新城疫病毒作血凝抑制试验，检测结果三种单抗只对H3亚型禽流感病毒有血凝抑制效价 说明所制备的单抗与这些病毒均无交叉反应，具有很好的特异性。 HA是流感病毒的主要表面抗原，一般情况下，新分离的毒株鉴定，一般要做HA的亚型鉴定，故研究针对HA的Mabs，并以其建立快速的检测方法，具有十分重要的意义。 本研究中制备的3株抗H3亚型的Mabs，为抗原分型、血清学诊断、疫苗质量监控及流行病学调查奠定了基础。 3.3 关于抗H3N8 HA蛋白单抗 致谢 感谢导师金梅林教授的指导和教诲以及三年来的关心、支持和鼓励。 感谢我的老师、亲人和朋友，感谢所有给我帮助和支持的人。 抗流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定 1.文献综述 2.单抗的制备与鉴定 目的意义 材料方法 结果与分析 3.讨论 1.文献综述 1.1 流感的病原学 流感病毒在病毒分类学上属正粘病毒科 －A型、B型流感病毒属和C型流感病毒属 A型流感病毒亚型 －HA: 16 －NA: 10 高致病性禽流感 (HPAI) --H5 and H7 1.2 流感病毒检测技术 1.2.1 病毒的分离鉴定 1.2.2 血清学诊断技术 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验 琼脂凝胶扩散试验（AGID） 神经氨酸酶抑制试验（NIT） 病毒中和试验（NT） 免疫荧光技术（IFT） 酶联免疫吸附试验 （ELISA） 1.2.3 分子生物学诊断技术  PCR 诊断技术 实时荧光定量PCR NASBA法 核酸探针技术 M 检测法　 基因芯片技术　 2 单抗的制备与鉴定2.1 研究目的与意义 流感是第一个实行全球监控的传染性疾病。对人及禽、畜的危害十分巨大。除禽流感外，常见的还有人流感、马流感和猪流感等。 动物流感尤其是禽流感与人类流感和人类健康非常密切，禽流感被认为是人流感病毒的保存和发生变异的新基因的来源，这种联系是通过中间宿主来实现的。猪是人源、禽源和猪源流感病毒的唯一共同易感宿主，它能将流感病毒传播给人。 2.1 研究目的与意义 流感的监控工作是预防与控制该病的一个重要环节。国内对流感病毒的临床诊断主要是对抗体的检测。 病毒抗原检测方面，虽然病毒的分离鉴定是诊断禽流感的一种可靠方法，但病毒的分离鉴定、动物接种试验操作复杂，周期长，难以满足对高致病性禽流感快速诊断的需要。聚合酶链式反应（PCR）、核酸探针等方法则需要较好的试验条件和较高的人员素质，目前还难以广泛推广 。 流感病毒的HA蛋白具有亚型特异性，但NP蛋白却相对保守。 利用NP蛋白和HA蛋白分别有望建立一种所有亚型禽流感病毒的检测方法和诊断流感病毒亚型的方法。而单克隆抗体由于由于特异性以及高度亲和力，用于病毒学诊断时相较于多抗有许多优点。 本研究利用杂交瘤技术获得了抗禽流感病毒NP蛋白和H3亚型禽流感病毒HA蛋白的单抗，为对禽流感病毒的进一步研究和建立针对所有亚型禽流感病毒和H3亚型的检测方法奠定基础。 2.1 研究目的与意义 2.2 材料方法2.2.1 细胞、病毒与动物