64频道细胞外电位记录系统(MED64).doc

FAHB0A25 第 PAGE 1 頁，共 NUMPAGES 17 頁 64頻道細胞外電位記錄系統 (MED64) 操作方法 本儀器使用之操作規範請見「64頻道細胞外電位記錄系統操作作業標準」(FAHB0C340) 簡介 傳統電生理研究，僅能針對組織單點進行電位變化的測量，若欲進行組織平面測量，則必需重複多次，進行不同位置的記錄才能得到。64頻道細胞外電位記錄系統可提供組織切片上64點電位的記錄，藉此可大大減少實驗所需的時間，同時也得到平面式的穩定數據。因此可以加速電生理的研究與發展。 將欲測知電位變化之組織切片（如腦切片、分離之神經元或細胞）持續培養在有64個微電極（microelectrode）的探測盤 (probe) 上。探測盤上之微電極，可作為細胞活性基礎電位的紀錄及輸入電流刺激細胞時，電位變化之紀錄。由細胞或組織所產生的自發性電位或是刺激後所產生的電位訊號被probe所收集。這些由probe所收集到的訊號，經由連結器 (connector) 傳送到整合型訊號放大器 (integrated amplifier) 中，再利用電腦上的軟體 (performer or conductor) 觀察、紀錄與分析變化。 2. 儀器設備及耗材 2.1. MED64整合性放大器 (64-Channel integrated amplifier; SU-MED640P)，內建刺激器也可搭配外接刺激器。 2.2. MED-P515A 探測盤，用來承載切片、提供電極刺激，並紀錄電位變化。 2.3. 連結器 (connector) 具有多層護盾（electrical shield）可將干擾電隔離（如傳統式電生理之銅網效果），以減少雜訊得到高的訊雜比（signal-to-noise）。 2.4. MED64 Conductor software，可按照使用者的步驟設計，完成實驗。 2.5. MIC-D數位式顯微鏡，可用來觀察切片的狀況及電極定位。 2.6. MED64 灌流蓋 (perfusion cap)，可持續提供新鮮的溶液與氧氣。 2.7. 錨片 (anchor)，加強切片與電極接觸並固定切片避免漂移。 2.8. 切片機 (microslicer; DTK-1000)。 3. 操作步驟 3.1.探測盤使用前的預先處理 3.1.1. 在運送前已經清潔乾淨，如有任何灰塵在探測盤上，可噴灑蒸餾水來清潔。 3.1.2. 為了增加組織切片或培養細胞的貼附，需對探測盤底部進行披覆 (coating) 處理。新的探測盤應該僅需要一次的披覆。 3.1.2.1 針對組織切片的披覆：取1 ml Polyethylenimine (PEI)溶液倒入新的探測盤後，覆蓋parafilm在其上，放置至少12個小時。披覆完成後，在放置切片前將探測盤用已消毒之蒸餾水沖洗3遍。請注意，探測盤在加入PEI後雖可保存一段時間，但不建議存放太久，否則PEI將有可能產生毒性，殘留在探測盤內對實驗結果造成影響。 PEI的配方： 0.1% polyethylenimine solution in 25 mM borate buffer (pH 8.4) 1) Borate Buffer - Dissolve sodium borate (Na2B4O7/10 H2O; 9.525 g for 1L) - Adjust pH to 8.4 with 1N HCl - Keep in refrigerator (4℃) 2) 0.1% polyethylenimine (PEI) solution - Dilute polyethylenimine (SIGMA, P-3143 50% solution) to 0.1% with borate buffer 化合物來源： Polyethylenimine: Sigma P3143 (50% aqueous solution) 3.1.2.2 針對細胞培養的披覆：膠原蛋白凝膠披覆 (Collagen gel coating)。所有步驟必須在無菌之條件下進行，以為細胞培養做準備。披覆的步驟必須在將細胞放入探測盤前至少8小時要完成，如此方可辨認探測盤是否有被污染。 先以70%酒精消毒 MED 探測盤，切勿以高溫高壓滅菌法 (Autoclave) 滅菌之。 在乾淨區域將 MED 探測盤乾燥之；之後，以紫外線照射15分鐘。 將 MED 探測盤放在冷藏處至少1小時。 將 MED 探測盤自冷藏處取出，加入膠原蛋白溶液。液體應完整覆蓋到微電極 (microelectrode) 及探測盤內的底部。剩餘膠原蛋白溶液依舊可用來披覆其他探測盤。 在二氧化碳培養箱 (CO2 incub