东乡野生稻SRFP1基因鉴定与分析-生物化学与分子生物学专业论文.pdf.docxVIP

万方数据 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 东乡野生稻拥有耐旱、耐冷和抗虫病等多种优良性状，含有丰富的种质基因资源， 素有“植物大熊猫”之称，在水稻种质改良中具有重要的利用价值。植物蛋白质泛素化 降解途径与植物调节胁迫反应紧密相关，E3泛素连接酶是蛋白质泛素化降解途径的 关键酶之一，能在转录和翻译水平调节植物的非生物胁迫反应。挖掘和开发东乡野生 稻的蛋白质泛素化降解途径关键基因，对于东乡野生稻优良性状机理的研究和有利基 因的开发利用具有重要意义。 本研究以东乡野生稻为研究材料，从其冬季根cDNA文库中筛选出一个具有完整 ORF阅读框的基因脚1，783bp，编码一个260个氨基酸的环指E3型蛋白。 通过生物信息学分析表明，东乡野生稻蛋白SRFPl和拟南芥的蛋白MIELI亲缘 关系比较近，它们之间蛋白氨基酸序列具有63％的相似性。该基因的启动子顺式元件 分析显示，该基因具有ACE(光响应元件)，HSE(热应激响应与元件)，MSA．1ike (控制细胞周期的响应元件)以及ABRE(ABA应答元件)等响应元件，很可能接 受光的诱导调节、参与植物蛋白代谢、细胞周期调节以及防御和胁迫应激反应过程。 为深入研究SRFPl蛋白，构建了pET-28a(+)．SRFPl重组载体并转入大肠杆菌 BL21中，诱导表达后经SDS—PAGE电泳检测，得到相对分子量约为29．8 kD的SRFPl 融合蛋白。经过进一步的纯化分离，获得高质量活性融合蛋白。蛋白的热稳定研究分 析表明该蛋白是热不稳定蛋白。 采用RT-PCR技术分析了东乡野生稻SRFPl基因mRNA在不同生长期的根与叶 的表达量，结果发现该基因在开花期的表达量最多。进一步分析不同胁迫处理下东乡 野生稻三叶期幼苗中该基因的表达量，发现艘卯l基因受冷胁迫、ABA、H202、NaCI、 PEG6000等的诱导表达，在ABA诱导下SRFPl基因明显增加，是对照的11倍，说 明SRFPl蛋白是东乡野生稻ABA依赖的信号通路的效应蛋白。 本研究克隆了东乡野生稻SRFPl基因，通过生物信息学分析该基因和蛋白基本 特性；原核克隆表达了该SRFPl蛋白，检测表明该蛋白热不稳定；RT-PCR分析表明 该基因在东乡野生稻开花期的表达量增多，并受冷胁迫、ABA、HE02、NaCI、PEG6000 等胁迫的诱导表达。在ABA诱导下SRFPl基因明显增加，表示SRFPl蛋白是ABA 信号通路的效应蛋白，参与了ABA信号传导。本研究为东乡野生稻的有利基因的开 发利用奠定基础。 关键词：东乡野生稻；SRFPl；RT-PCR；胁迫 IV AbstractAbstract Abstract Abstract Dongxiang wild rice is rich in excellent traits and genetic resources，such as drought tolerance，cold resistance to disease and SO on,which is known as”the plant panda”，and of great significance in the improvement of rice germplasm．The plant ubiquitin protein degradation pathway is closely related to the regulation of stress response．The E3 ubiquitin ligase is one of key enzymes in protein degradation by ubiquitination pathway that is proved to involve in regulation of plant abiotic stress response at the levels of transcription and translation．Focuing on the key genes in protein ubiquitin degradation pathway of Dongxiang wild rice has important significance in studies On mechanisms in stress resistance and the utilization of favorable genes． In this study,a SRFPl gene with a complete ORF of 783 bp was cloned from the the eDNA library of Dongxiang winter wild rice root