第三章紫外可见分光上光度法.ppt

由于各种显色反应的速度不同，且介质酸度、显色剂的浓度都将会影响显色时间。 必须固定其他显色条件，通过实验作出A-t曲线，才能确定适宜的显色时间和测定时间。 3、显色时间 显色反应须在适当温度下进行。 一般的显色反应也可以在室温下进行。 4、温度 溶液的性质可直接影响被测物质对光的吸收，且显色反应产物的稳定性也与溶剂有关。 苦味酸在水溶液中呈黄色，在三氯甲烷在呈无色。 硫氰酸铁红色配合物在丁醇中比在水溶液中稳定。 5、溶剂 溶 剂 截止波长（nm） 溶 剂 截止波长（nm） 水 200 环己烷 200 乙 腈 210 正己烷 220 95%乙醇 210 二氯甲烷 235 乙 醚 210 三氯甲烷 245 异丙醇 210 四氯化碳 265 正丁醇 210 苯 280 甲 醇 215 丙 酮 330 第四节 紫外-可见分光光度法的应用 一、定性分析 二、纯度检查 三、定量分析 四、结构分析 五、应用与示例 利用紫外吸收光谱的形状、吸收峰的数目、各吸收峰的波长和相应的吸收系数等可对部分有机化合物进行定性鉴别。 3.吸收峰的数目 1.吸收光谱形状 2.各吸收峰的波长 4.相应波长处的吸收系数 一、定性分析 定性分析方法：对比法 1、比较吸收光谱的一致性 两个相同化合物，在同一条件下测定其吸收光谱应完全一致。 一、定性分析 例 安宫黄体酮和炔诺酮分子中都存在α、β-不饱和羰基的特征吸收结构，最大吸收波长相同但相对分子量不同，有明显差异，可用于鉴别。 安宫黄体酮（M＝386.53） 炔诺酮（M= 298.43） λmax240±1nm λmax240±1nm ＝408 ＝571 2、比较吸收光谱的特征数据 一、定性分析 3、比较吸光度（或吸收系数）比值 有多个吸收峰的化合物，可利用在不同吸收峰（或峰与谷）处测得吸光度的比值A1/A2或ε1/ε2作为鉴别的依据。 例 《中国药典》（2015年版）对叶酸采用下述方法鉴别：将检品按规定方法配成10μg/ml的溶液，分别测定256nm和365nm处的吸光度，两者比值应为2.8~3.0。 一、定性分析 二、纯度检查 1、杂质检查 利用试样与所含杂质在紫外-可见光区吸收的差异。 2、杂质的限量检测 药物地蒽酚中常有其制备的原料和氧化分解产物二羟基蒽醌。在三氯甲烷溶液中两者的紫外吸收光谱有显著差异，《中国药典》（2015年版）规定，0.01%的地蒽酚三氯甲烷溶液用1cm吸收池在432nm处测定，吸光度不得大于0.12，即相当于含二羟基蒽醌的含量不大于2.0%。  地蒽酚和二羟基蒽醌的紫外吸收光谱 二、纯度检查 （一）单组分样品的定量分析 （二）多组分样品的定量分析 三、定量分析 1、单组分样品定量分析的条件 在一个试样中只要测定一种组分，且在选定的测量波长下，试样中其它组分对该组分不干扰。 2、单组分样品定量分析的方法 （1）吸收系数法 （2）标准曲线法 （3）标准对照法 （一）单组分样品的定量分析 （1）吸光系数法 根据Beer定律，若l和吸收系数ε或 已知，即可根据供试品溶液测得的A值求出被测组分的浓度。 （一）单组分样品的定量分析 例 维生素B12的水溶液在361nm处的 值是207，盛于1cm吸收池中，测得溶液的吸光度为0.621，则溶液浓度为： c = 0.621/(207×1)=0.00300 (g/100ml) 注意：用 ， 则c单位为g/100ml；用ε，则c单位为mol/L。 （2）标准曲线法 先配制一系列不同浓度的标准溶液，以不含被测组分的空白溶液作参比，测定系列标准溶液的吸光度，绘制吸光度-浓度曲线，称为标准曲线，进而拟合出回归方程。 在相同的条件下测定试样溶液的吸光度，从标准曲线山找出对应的浓度，或者从回归方程求出被测组分浓度。 （一）单组分样品的定量分析 （3）标准对照法 在相同条件下配制标准溶液和供试品溶液，在选定波长处，分别测其吸光度，根据朗伯-比尔定律,因标准溶液和供试品溶液是同种物质、同台仪器及同一波长于厚度相同的吸收池中测定，故l和E均相等，有 注意：标准对照法应用的前提是方法学考察时制备的标准曲线应过原点。 （一）单组分样品的定量分析 适用条件：若样品中有两种或两种以上的吸光组分共存时，可根据吸收光谱相互重叠的情况分别采用不同的测定方法。 （二）多组分样品的定量分析 2、根据吸光度加和性原理计算出b的浓度Cb 1、按单组分的测定法 3、计算分光光度法 2、根据吸光度加和性原理计算出b的浓度Cb 部分重叠时，可先在λ1处按单组分测定法测出