环状等温扩增技术快速检测转基因玉米MON863的研究-玉米科学.PDFVIP

玉 米 科 学 2011 ，19(1)：31～34 Journal%of%Maize%Sciences 文章编号 ： 1005-0906(2011)01-0031-04 环状等温扩增技术快速检测转基因 玉米 MON863 的研究 兰青阔，王 永，赵 新，朱 珠，程 奕 (天津市农业科学院中心实验室，天津 300381) % % % % 摘 要 ： 采用环状等温扩增技术(Loop-Mediated%Isothermal%Amplification ，LAMP) ，针对转基因玉米品系 MON863 中玉米基因组与外源基因结合处设计 4 条特异性引物，建立 MON863 的快速检测技术体系，并对时间、温度等反应 条件及体系灵敏度、特异性等进行探索 。 结果表明：该检测体系最适反应温度为 63℃ ，反应时间 60%min ，灵敏度是常 规定性 PCR 的 10 倍。 该检测方法具有高度的特异性和稳定性，操作方便、简单、省时。 关键词 ： 转基因玉米；MON863 ；环状等温扩增技术(LAMP) ；快速检测 中图分类号： S513.037% % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % % 文献标识码 ： A Study on Rapid Detection of Transgenic Maize MON863 by LAMP LAN%Qing-kuo,%WANG%Yong,%ZHAO%Xin,%ZHU%Zhu,%CHENG%Yi (Central Lab of Tianjin Agricultural Academy Sciences, Tianjin 300381,%China) % % % % Abstract:%Based%on%the%loop-mediated%isothermal%amplification (LAMP)%reaction,%four%specific%primers%were%de- signed%according%to%the%six%regions%of%the%unique%and%specific%integration%junction%sequences%between%the%host%plant% genome%DNA%and%the%integrated%gene%of%MON863.%The%LAMP%system%and%program%were%optimized.%The%results%showed% that% the% optimum% temperature% and% time% was% 63℃ and% 60min,% respectively.% The% sensitivity% of% LAMP% detection% was% 0.01%,%which%was%10%times%more%sensitive%than%the%conventional%PCR.%Results%indicated%that%LAMP%could%provide%a% sensitive,%specific,%stable%and%reliable%method%for%the%detection%of%MON863. % % % % Key words:%Transgenic%maize;%MON863;%Loop-mediated%isothermal%amplification(LAMP);%Rapid%detection% 环状等温扩增技术(Loop-Mediated%Isothennal%Am- 转基因玉米品系 MON863 是美国孟山都公司 plification ，LAMP)是 2000 年日本科学家 Notomi 等建 2003 年投放市场的转基因产品， 具有防病虫害能 立的一种等温扩增技术[1] 。 通过对目