第二章名酶化学.ppt

台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省 酶是生物催化剂，由于酶的存在，生物体内进行的反应比无生命界中进行的同样反应有效得多。在四支试管中 ，分别加入过氧化氢溶液。在第一支试管中，可以看到管壁上缓慢的生成气泡，这是过氧化氢自发分解为氢气和氧气。在第二支试管中，加入少许铁屑，可以看到气泡增多，说明铁催化下，过氧化氢分解加快。在第三支试管中，加入少许小鼠肝糜，可以看到气泡急剧增加，说明鼠肝中过氧化氢酶的催化作用比铁屑强的多。在第三支试管中，加入少许煮过的小鼠肝糜，气泡产生情况约与第一支试管相当，说明鼠肝中过氧化氢酶煮后失去活性，没有催化作用。 4.酶活性受到调节和控制：区别于一般催化剂的重要特征。 （1)调节酶的浓度:一种是诱导或抑制酶的合成；一种是调节酶的降解。例如乳糖操纵子，大肠杆菌的葡萄糖抑制效应。 （2)通过激素调节酶活性：激素通过与细胞膜或细胞内受体结合而引起的一系列生物学效应。例如乳腺组织合成乳糖，乳糖合成酶由催化亚基和调节亚基组成，催化亚基单独存在不能合成乳糖，调节亚基本身无催化活性，是乳汁中的a－乳清蛋白，与催化亚基结合后催化半乳糖和葡萄糖反应生成乳糖，而调节亚基是受激素调节的，怀孕期间合成少，分娩后由于催乳素大量增加所以调节亚基大量合成，与催化亚基结合成乳糖合成酶，大量合成乳糖以适应生理需要。 乳糖不耐症 母乳喂养 （3)反馈抑制调节酶活性 反馈抑制：许多小分子物质的合成是由一连串的反应组成的，催化此物质生成第一步的酶往往被终端产物抑制。 A－‖ →B →C →D →P（终端产物） 为P所抑制 （4）抑制剂和激活剂对酶活性的影响 酶受大分子抑制剂或小分子物质抑制 （5）其它方式调节：如别构调控、酶原激活、酶的可逆共价修饰、同工酶调节等等。 （一）结构专一性:包括绝对专一性和相对专一性 1、绝对专一性：酶对底物的要求严格，只作用于一种底物，而不作用于其它物质。脲酶－尿素；麦芽糖酶－麦芽糖 2、相对专一性：可作用于一类结构相似的底物，包括族专一性和键专一性。族专一性：酶对链两端的基团要求程度不同，对其中一个基团要求高，对另一个要求不严格，如a－D葡萄糖糖苷酶（要有a－糖苷键和葡萄糖残基）；键专一性：只要求作用 于底物一定的键，对两端的基团无严格要求，如酯酶。 凝血酶：水解羧基端为精氨酸氨基端为甘氨酸之间的肽键胰蛋白酶：水解赖氨酸或精氨酸羧基形成的肽键 胰凝乳蛋白酶：专一地水解由芳香族氨基酸或带有较大非极性侧链氨基酸羧基形成的肽键。 弹性蛋白酶：专一水解丙氨酸、甘氨酸及短脂肪链氨基酸羧基形成的肽键。 胃蛋白酶：水解芳香族氨基酸或疏水性氨基酸羧基或氨基形成的肽键。 氨肽酶：水解氨基末端氨基酸。 羧肽酶：水解羧基末端氨基酸。 （二）、立体异构专一性 1、旋光异构专一性：L型和D型，如L－氨基酸氧化酶只能催化L－氨基酸。 2、几何异构专一性（顺反异构）：如琥珀酸脱氢酶只能催化琥珀酸生成延胡索酸（反丁烯二酸），而不能生成顺丁烯二酸 2、活性中心的特点 （1）活性中心在酶分子中只占很小的一部分，体积的1－3％ （2）酶的活性中心具有三维空间结构，由一级结构决定的，酶的空间结构决定了活性部位的空间结构，一旦酶的高级结构受到影响，则活性中心破坏，酶失活。 （3）构成酶活性中心的几个氨基酸在一级结构上并不紧密邻近，可能相距很远，甚至在不同的肽链上，但由于折叠弯曲彼此靠近并形成特定的空间结构的区域。如胰凝乳蛋白酶的活性中心的三个氨基酸：His12、Asp102、Ser195 （4）酶的活性中心和底物不是正好互补的，酶或底物分子有时两者的构象同时发生变化彼此才互补。 酶把底物分子从溶液中富集出来，使它们固定在活性中心附近，反应基团相互邻近，同时使反应基团的分子轨道以正确方位相互交叠，反应易于发生。 米氏方程式 （三）酶浓度对酶促反应速率的影响 pH对酶作用的影响机制： 1、环境过酸、过碱破坏酶的空间结构，引起酶的构象改变，酶活性丧失； 2、影响酶活性基团的解离，从而影响与底物的结合，使得酶的活性降低； 3、影响维持酶分子空间结构的有关基团解离，从而影响酶活性部位的构象，而影响酶的活性。 （六）激活剂对酶作用的影响 Rs=81 米氏类型酶 Rs?81 具有正协同效应的别构酶 Rs?81 具有负协同效应的别构酶 3、酶分离的方法：1.根据溶解度不同（盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、选择性沉淀法）； 2.根据酶蛋白分子大小的差别（凝胶过滤法、超离心法）；3.根据酶蛋白与吸附剂之间吸附与解吸附性质的不同（吸附分离法）；4.根据带电性质（离子交换层析法、电泳分离法、等电聚焦层析法）；5.根据酶蛋白的稳定性差别（选择性变性法）；6.根据酶