食品卫生微生物学检验大肠执菌群计数培训.pptVIP

* 现在标准里所给出的MPN表要简化一些，那么为什么要做如此的改变呢？我们将在后面的讨论中提到这个问题。 ★ ★ ★ 再一个修改是标准名称的修改，原来叫大肠菌群测定，现在叫大肠菌群计数。 * 这就是大肠菌群计数MPN法的操作程序图。可能有点小，看不清楚。下面是具体操作步骤。 * 这里的6，采用的是标准文本中的条文号。 ★ ★ ★ 样品的稀释，样品的稀释是个通用的规定，和细菌总数、金葡菌等等标准的规定是通用的。在ISO标准里这部分内容是作为一个单独的标准来规定的，即ISO6887，微生物检验的试样、均液和10倍系列稀释液的制备。 ★ ★ ★ 这一条是对冷冻样品化冻的要求。这一条比较重要，对检验结果的影响也可能比较大。在FDA的一个样品抽取和制备的标准里，建议冷冻样品不必完全融化，只要软化到能够取样和制样就可以了。比如，如果将一块冻肉化得血水都流出来了，再去制样和检验，结果的准确性可能会有些影响。 ★ ★ ★ 样品匀液的制备 ★ ★ ★ 对于固体和半固体样品，标准给出了两种均质方式。即：用旋转式均质器或拍打式或叫蠕动式均质器均质。现在很多的人都喜欢用拍打式均质器。不过，请注意，根据ISO7218食品微生物检验通则的规定，有些样品是不能使用拍打式均质器的，如一些具有穿刺风险的样品（带刺的样品，鱼），还有一些由于自身质地特殊难以均质的样品，像腌制香肠…… 另一个值得注意的是，对于冷冻的固体样品，检验前的解冻。一般是建议 2℃～5℃解冻,时间不超过18h，或在不超过45℃的温度中解冻，时间不超过15min。在FDA的一个样品抽取和制备的标准里，建议冷冻样品不必完全融化，只要软化到能够取样和制样就可以了。比如，如果将一块冻肉化得血水都流出来了，再去制样和检验，结果的准确性可能会有些影响。 ★ ★ ★ 对液体样品的均质就相对简单多了。你甚至可以用合适的玻璃棒作为均质工具。 ★ ★ ★ 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时要进行调节，如有些果汁pH值很低，如果不进行调节，检验结果的误差可能就会比较大。 * ★ ★ ★ 在进行倍比稀释的时候，上一个稀释度用的吸管不要触及下一稀释度的液面。 ★ ★ ★ 依次制成系列十倍递增样品匀液，每做一个稀释度要换用一支吸管。 注意从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。 之所以把样品制备这部分内容详细地投影出来，是因为在下面讨论粪大肠菌群和大肠杆菌检验时就不再重复这部分内容了。 * 请注意，这里说的是选择适宜的三个连续稀释度的样品均液。 ★ ★ ★ 什么是适宜的三个连续的稀释度呢？对有些样品还是比较容易确定的，但有些样品就不太容易确定了，特别是在实验开始之前。我们在实际工作中为了保险起见，可能选择多于3个的连续稀释度，4个或者5个，那么这些稀释度的结果出来之后，我们应该选用哪三个稀释度去查表报告结果呢？这个问题我们将在后面的内容里讨论。 对双料培养基的规定与原4789.3相同★ ★ ★ 。 ISO标准对双料的规定是这样的，接种10ml时用双料，接种量超过10ml的用单料，但样液和培养基的体积之比应为1：9，例如如果接种50ml样液，应该用450ml的单料培养基。这一点，我们在实际工作中可以借鉴。 在初发酵阶段时经观察未产气的管即为大肠菌群阴性管；对产气管，则进行复发酵的证实试验 * 复发酵证实实验使用的是煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管，培养后，产气管即为大肠菌群阳性管，未产气的即为大肠菌群阴性管。 * 这是未接种培养时的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管 * 这是培养后大肠菌群阳性的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管，由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸生成的酸而形成胆酸沉淀，所以比较浑浊，而且也可以看到管底的沉淀。 * 现在根据阳性管数和阴性管数查MPN表，就可以报告每 g (mL)样品中大肠菌群的MPN值了。 * 这是标准中所给出的MPN表，这张幻灯片里只显示出了部分内容，这个表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准所通用的MPN表。至于为什么都使用这个MPN表，所有MPN方法的ISO标准里都无一例外地给出了他的参考文献。—— De Man, J. C. MPN table, corrected. Eur. J. Appl. Biotechnol., 17, 1983, pp. 301-305.