碳水化合物值的测定.pptVIP

第五节 碳水化合物的测定Carbohydrates Determination 一 概 述 二 糖类的提取与澄清 三 糖类的测定 四 淀粉的测定 五 粗纤维的测定 六 果胶物质的测定 一 概 述 （二）、测定意义 二?糖类的提取与澄清 （二）.澄清剂 2.?对澄清剂的要求： 1）除干扰物质完全，不吸附被测糖 2）过量澄清剂不影响糖的测量 3）沉淀颗粒要小，操作简便 4）不改变糖类的比旋光度及理化性质 （三）.常用的除铅剂 三 糖的测定方法 (一).还原糖的测定方法 1 直接滴定法（斐林氏溶液法） 1.5注意事项！ 4）如何对样品提取液进行澄清？ 为了除去色素、少量蛋白质、可溶性果胶、有机酸、氨基酸等物质，需加入一定量澄清剂，混匀沉淀，静置后过滤得到澄清的提取液。 5）使用澄清剂要注意的问题： 　 ① 应根据样液的种类、干扰成分的种类及含量进行选择，同时还要考虑所采用的分析方法。 如用直接滴定法测定时不能用硫酸铜－氢氧化钠溶液，以免在样液中引入Cu2+；用高锰酸钾滴定法测定时不能用乙酸锌－亚铁氰化钾溶液，以免在样液中引入Fe2+。 ②澄清剂的用量要适当。用量太少，达不到澄清的目的；用量太多，会使检测结果产生误差。 ③用醋酸铅作澄清剂时要除铅。但除铅剂在保证使铅完全沉淀的前提下尽量少用。 6）斐林试剂的标定和样品液中还原糖的滴定过程应注意的问题： ①滴定必须在沸腾条件下进行，不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定。以免空气进入反应液中，使次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。因为次甲基蓝在碱性溶液中被过量的还原糖还原成“无色染基”，它在常温下极易被大气中的氧气氧化成原来的蓝色，影响终点测定，故滴定时瓶中溶液须保持沸腾状态，同时滴定时要快速，尽可能在短时间内滴定至终点。 ②预滴定和正式滴定的反应条件应一致。还原糖的浓度和体积、热源强度、煮沸时间和滴定速度应严格控制，保持一致，否则对测定结果影响很大。 7）样液预测的目的： ①是本法对样液中还原糖浓度有一定要求(0.1%左右)，测定时样液的消耗体积应与标定葡萄糖标液时消耗的体积相近，通过预测可了解样液浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整，使预测时消耗样液量在 10ml左右。 ②是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1ml 左右的样液，只留下1ml左右样液在续滴定时加入，以保证在1min内完成续滴定工作，提高测定的准确度。 ① 为什么滴定必须在沸腾条件下进行？ 　② 为什么要求预滴定和正式滴定的反应条件应一致？ 　③ 为什么碱性酒石酸铜甲液和乙液要分别贮存，用时才能混合？ 　④ 为什么在正式滴定时要预加比预滴定少0.5-1mL的标准葡萄糖溶液或样品溶液？ 　⑤ 为什么要对葡萄糖标液进行标定？ 2 改良快速直接滴定法 在直接滴定法中，斐林试剂的标定（空白滴定）是用标液滴定，样品液中还原糖的滴定用样液滴定，使用两支管，操作环节繁琐，有人对此进行了改进。 　　操作上的主要不同在样品液中还原糖的滴定： ①预滴定： 准确吸取斐林氏A、B液各5mL于锥形瓶中，加水10mL，加样品液10.00mL，摇匀。在电炉上加热2min内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。 ②正式滴定： 准确吸取斐林氏A、B液各5mL于锥形瓶中，加水10mL，加样品液10.00mL，先加比预滴定少0.5-1mL的标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热2min内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。 样品液中还原糖的滴定也是用标液滴定，不需更换滴定管。 3.KMnO4（高锰酸钾法） ① 根据滴定时所消耗的高锰酸钾标准溶液的量计算。 X1=(V-V0)c×71.54 X1——试样中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg； V——消耗高锰酸钾标准溶液的体积，mL； V0——试剂空白消耗高锰酸钾标准溶液的体积，mL； c——KMnO4标准溶液的浓度，mol／L； 71.54——0.1mmol高锰酸钾相当于氧化亚铜的质量，mg。 ② 根据上式计算所得氧化亚铜量，查表再计算得出相当于还原糖的量。 m1 X 2=