基于双向凝胶电泳技术的中医寒-世界科学技术——中医药现代化.PDF

2015　第十七卷　第十期　★Vol.17 No.10 基于双向凝胶电泳技术的中医寒、热体 大鼠蛋白质组表达谱研究＊ 张伟妃，李福凤，孙祝美，张瑞义，郭春荣，张伟荣＊＊ （上海中医药大学教学实验中心 上海 201203 ） 摘  要：目的：利用双向凝胶电泳技术对中医寒、热体大鼠进行蛋白质组表达谱研究, 以期寻找与寒热 体相关的蛋白质，并探讨中医寒、热体形成的生物学基础。方法：提取大鼠肝脏细胞的总蛋白，采用双向凝 胶电泳（2-DE ）及MALDI-TOF-MS 质谱技术筛选并鉴定寒热体表达差异的蛋白质群。结果：经过筛选和 质谱技术共获得 10 个具有统计学意义的蛋白表达差异点：氨甲酰磷酸合成酶、二硫键异构酶、过氧化氢酶、 过氧化氢异构酶、细胞质氨肽酶、谷氨酸脱氢酶、3- 羟基-3- 甲基戊二酰辅酶、热休克蛋白前体、同型半胱 氨酸、葡萄糖调节蛋白前体。结论：中医寒热体大鼠在蛋白质组表达方面存在一定的差异性，酶类蛋白代谢 异常可能是寒热体形成的物质基础之一。 关键词：寒体 热体 差异蛋白质 双向凝胶电泳 质谱分析 doi ：10.11842/wst.2015.10.016　　中图分类号：R223　　文献标识码：A 中医体质是在人体生命过程中，基于先天禀赋 在同一环境和条件下，恒温20 ±2 ℃，自动光暗控制 [1] （即早7 ：00- 晚19：00 光照，晚19：00- 早7 ：00 暗置）； 以及后天获得而形成的相对稳定的固有特质 。体 质学说是中国传统医学的重要内容之一，在各种体 本实验中大鼠均饲养在上海中医药大学动物实验 质分类方法中，寒、热体质是两种性质相反的基本 中心，相对湿度60%-70% ，自由进食及饮水。饲养 体质类型。本课题组前期围绕中医寒、热的本质问 1 周使大鼠适应环境后再进行实验。使用WMY-01 [2-6] 题开展了多方面的研究，并取得了一定的成果 。 型数字温度计（精确度为0.01 ℃）测定大鼠后脚掌 [7] 由于对寒、热体质在蛋白质表达水平的定量差异研 的掌心温度 ，每天同一时间点进行测定，不间断测 究尚未见报道，所以本实验以双向凝胶电泳技术来 量 10 次，计算每日群体的平均掌温，其中后脚掌掌 研究中医寒、热体大鼠的蛋白质表达，进一步探讨 心表面温度较群体的平均温度低1℃以上者为寒体； 寒体和热体的产生机制。 较自然群体的平均温度高 1 ℃以上者为热体；上下 不超过0.2 ℃者为常体。每个个体多次测量的结果 1  实验材料与方法 其变动幅度应在±2 ℃以内，超过此幅度的大鼠不 .   实验动物及分组 1 1 纳入筛选范围。最终，本实验共筛选出常体大鼠6 同一批次Wistar 雄性大鼠 100 只，体质量均为 只、寒体大鼠4 只、热体大鼠6 只。 120 ±10 g，由上海中医药大学提供，检测合格证号： .   主要仪器和试剂 1 2 SCXK2013-0016 （沪）。实验条件：实验大鼠饲养 4800 串联飞行时间质谱仪（Applied Biosystems SCIEX ，USA ）；4000 细胞加载培养系统（Flexercell ）； 　　　收稿日期：2015-03-11 Ettan IP Gphor