不同保存条件下中华哲水蚤基因组DNA提取的比较.PDF

实验与技术 实验与技术 EXPERIMENT TECHNOLOGY EXPERIMENT TECHNOLOGY 不同保存条件下中华哲水蚤基因组DNA 提取的比较 方旅平，林元烧，曹文清 （厦门大学海洋与环境学院，福建 厦门361005） 摘 要：以采自厦门港的中华哲水蚤（ ）为对象，研究多种保存条件对中华哲水 Calanus sinicus 蚤基因组 提取的影响。结果表明，除 福尔马林保存的样品没有提取到 之外，其 DNA 5% DNA 余样品均能成功提取出基因组DNA ；以该DNA 为模板通过相应引物成功扩增出线粒体DNA COI 基因片段。其中无水乙醇保存样品提取可靠的基因组DNA 方法的建立，为野外样品保存 工作提供了一个简便，经济的途径。 关键词： 中华哲水蚤（ ）；基因组 提取；保存方法 Calanus sinicus DNA 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： ( ) Q33 Q959 . 223 . 31 A 1000 - 3096 2005 02 - 0001 - 04 进入 世纪 年代以来，分子生物学技术引入 样品保存：首先将中华哲水蚤在解剖镜下清洁体 20 90 浮游动物遗传学的研究已受到广泛关注，此类研究对 表附着物，再利用多种方法对样品进行保存。值得注 DNA 质量的要求较高。已有的以DNA 为对象的研究 意的是固定的样品特别是单只冷冻保存的样品，在保 中大多数所采用的样品为活体样品或冷冻样品，但是 存之前用灭菌纯水进行多次充分的洗涤。 在野外工作尤其在海上这两者样品保存很难实现，因 1. 3 DNA 基因组提取 此一种简便可行，且又能满足DNA 水平研究分析的 取出保存的样品，若是无水乙醇保存的样品首 样品保存方法相当重要。针对该问题，作者以中华哲 先利用梯度稀释浸泡（每个梯度浸泡 ）的方法基本 1h 水蚤 ( Calanus sinicus ) 为研究对象，采用95% 乙醇 去除样品中的乙醇，其稀释梯度为60% , 30% , 10% ( ) 、 乙醇（ ）、 福尔马林( ) 、 溶液 4℃ 100% 4℃ 5% 4℃ TE 和灭菌纯水， 过夜，再将样品吸干，加入 溶液 4 ℃ TE ( - 80℃ ) 4 种保存方法对其进行处理（其中95% 乙醇 （ ） ；若为福尔马林保存样品，首先通过 pH 8 . 0 100 L µ 与 乙醇保存时间相差约为 ），提取基因组 100% 1a 梯度稀释浸泡的方法去除样品中的福尔马林，其稀释 ，通过凝胶电泳， 染色对所提取的基因组 DNA