荔枝核皂苷对时aβ25.docxVIP

目 目 录 1 荔枝核皂苷对A1325．35诱导BV-2细胞活化的抑制 1 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 4 1．3 前言 7 1．4材料与方法 10 1．5 结果 20 1．6 讨论 ··· ··· ·· · · · 一· ·32 1．7 结论 37 1．8 参考文献 39 1．9 英汉缩略词对照表 44 2 致谢 45 3 小胶质细胞在阿尔茨海默病发病中的作用(综述) 46 万方数据 一f嘲嬲掣 一f嘲嬲掣荔枝核皂苷对A1325．35诱导BV-2细胞活化的抑制 摘 要 目的：研究荔枝核皂苷对A1325-35诱导BV-2细胞活化的抑制作用及其 初步机制。方法：CCK．8试剂盒检测Ap25-35诱导BV-2细胞活化的最佳浓 度及作用时间、荔枝核皂苷对BV-2细胞的最大安全浓度及其抑制A1325-35 诱导BV-2细胞活化最适有效浓度；倒置显微镜观察BV-2细胞的形态学改 变；20pmol·L～A[325-35作用于BV-2细胞24h诱导BV-2细胞活化；Spss统 计软件经对数曲线法计算A1325_35诱导BV．2细胞活化的IC50。RT．PCR半 定量测定n师．0t mRNA表达；免疫印迹法检测TNF．0t蛋白表达。结果： 1．BV-2细胞形态学变化： 显微镜下(×400)， A1325-35作用于BV-2细胞 6h、12h、24h后，细胞数量减少，胞体均有不同程度的肥大，胞核增大且 不规则，部分细胞核发生融合，胞体梭形，伸出多个突起(静息态的分枝 状一活化态的阿米巴状)，并相互连接，随着作用时间延长，BV-2细胞数 量、形态改变更为明显。荔枝核皂苷+A1325-35+BV-2细胞共同培养24h后， 荔枝核皂苷干预组BV-2的形态学改变较模型组(A1325-35+BV-2细胞培养 24h)明显减轻。2．Ap25-35诱导BV-2细胞活化的最适浓度及时间：不同浓 度的Ap25_35分别作用BV-2细胞6h、12h、24h，其抑制率随着时间的延长 均相应升高，其中以24h的抑制率最高。与6h比较， 209mol·L～A1325-35 及以下浓度对BV-2细胞的抑制率在24h明显升高(尸O．05)；160、 801amol·L。Ap25．35在各时间点抑制率均超过50％；409mol·L。1在12h和24h 的抑制率50％，209mol·L～A1325．35只有在24h抑制率50％， 209mol·L～A1325．35在其它时间点及以下浓度对BV-2细胞的抑制率在各时间 万方数据 点均50％，且随着A1325-35浓度降低，抑制率也逐渐下降，但当浓度大于 点均50％，且随着A1325-35浓度降低，抑制率也逐渐下降，但当浓度大于 401xmol·L‘1其抑制率又明显上升。A1325-35在各时间点对BV-2细胞抑制率 1 60t．tmol·L。1801．tmol·L。1401．tmol·L’1209mol·L。11 01．tmol·L’15 gmol·L。12．5 1．tmol·L～。A1325-35诱导BV-2细胞的IC50为1 5．499mol·L～，与IC50最接近浓 度209mol·L～A1325-35的最大抑制率发生在24h。提示：209mol·L～A1325-35作 用BV-2细胞24h可以明显诱导BV-2活化。3．荔枝核总皂苷对BV-2细胞 最大无毒浓度及其抑制A1325_35诱导BV-2细胞活化的有效浓度：荔枝核皂 苷对BV-2细胞的最大安全或无毒浓度为3．75mg·L～，即荔枝核皂苷浓度≤ 3．75mg·L。1时，对BV-2细胞的活性无抑制效应。与模型组比较，0．469～3．75 mg·L。1荔枝核皂苷均可抑制209mol·L～A1325-35诱导的BV-2细胞活化，其抑 制作用强弱3．75 mg·L。1．875 mg·L-1O．938 mg·L。1O．469 mg·L～，即荔枝核 皂苷抑制Ap25．35诱导BV-2细胞活化的有效浓度在0．469～3．75 mg．L。1之间。 4．TNF-0【mRNA表达：与对照组比较，模型组(209mol·L。1A1325-35+BV-2细 胞)TNF—Oc mRNA表达水平明显升高；与模型组比较，不同浓度荔枝核皂 苷+209mol·L～A1325-35+BV-2细胞作用24h后， 4个不同浓度的荔枝核皂苷 均可降低TNF．仅mRNA表达，但4个剂量组间比较差异不明显。5．TNF．0【 蛋白表达：与对照组比较，模型组(209mol·L。1A1325-35+BV-2细胞)TNF．0【 蛋白表达条带的灰度值明显升高(尸O．05)；与模型组比较，不同浓度荔 枝核皂苷作用于201amol·LJAl325-35+BV-2细胞24h后， 4个不同浓度的荔 枝核皂苷均可