第七章 蛋白质检验.pptVIP

临床意义： 1.原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%原发增高） 2.其他肿瘤时也可见增高。胃癌、肺癌、胰腺癌睾 丸、卵巢、腹膜、恶性畸胎瘤以及其他消化道肿瘤AFP 可以升高。 3.其他疾病 如：良性肿瘤、炎症和退行性疾病（结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎、酒精性肝硬变、活动性肝病等）部分病人的含量也可增高，但其值远低于恶性疾病，一般小于20μg/L。对于一些难以鉴别的病例可做动态观察，其值逐渐上升或持续高水平则良性的可能性较小。 如：其他体液的CEA检测也用于诊断之中。胰液、胆汁、尿液等。胰液和胆汁内的CEA可用于诊断胰腺和胆道癌；尿液CEA作为判断膀胱癌预后的灵敏指标。 临床意义：正常参考值范围较宽，因此一次测定的价值不大，连续观察可用于监测急性时相反应和溶血是否处于进行状态。 现代蛋白质检验四大功能： 白球比正常值： 白蛋白要高于球蛋白，A/G正常值范围在1.5-2.5之间波动。 原因：当白球比A/G小于1.5时（也有很多以小于1为标准），这时被称为白球比倒置或白球比偏低。而在这个时候也就预示着肝脏已经受到了严重的损伤。 处理方法：白球比倒置的患者需要结合病史、症状等找出白球比倒置的原因，比如乙肝患者的白球比倒置，需要检查HBVDNA、肝胆B超、肝纤四项等，根据检查结果了解白球比倒置的原因，针对病因进行治疗。 3.多发性骨髓瘤和M蛋白血症如华氏巨球蛋白血症，良性单克隆免疫球蛋白增生症时血清β，γ区带处出现一特殊单克隆区带，称为M蛋白质，血清总蛋白增高。 4.炎症：急性感染可见α1或α2球蛋白增加，γ球蛋白正常;在慢性炎症或感染后期，可见γ球蛋白增加。 5.结缔组织病：系统性红斑狼疮，风湿性关节炎等自身免疫性患者可有不同程度的白蛋白下降及γ-球蛋白升高。 6.低γ球蛋白血症或无γ球蛋白血症：血清γ球蛋白极度下降或缺乏。 评价： 优点：简便，准确，重复性好，10g-120g/L线性好，特异性与精密度好，批内CV%＜2%，显色稳定。 缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适合。 应用：常规推荐方法。手工或上机使用。 3.酚试剂法 原理： 蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。 Lowry改良法：在酚试剂中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的灵敏度，为双缩脲法的100倍左右。 评价及应用： 优点：操作简单，改良法灵敏度高（10μg-60μg），适合测定蛋白含量少的标本。 缺点：各种蛋白质酪氨酸和色氨酸比例不同，只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。 4.比浊法 原理： 评价及应用： 优点：简便不需特殊仪器。 缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋白絮状沉淀等） 某些酸类（磺基水杨酸等）和血清蛋白质结合产生沉淀，测其浊度，与标准对比，可求蛋白含量。 5.染料结合法 在酸性环境下，带正电的蛋白质（-NH3+)与染料的阴离子产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法比色测定。 原理： 常用染料：氨基黑，考马斯亮蓝等 评价及应用： 优点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。 缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易 确定。 6.紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。 （1）Lowry-Kalcker 公式 蛋白质浓度（mg/ml）=1.45 A 280 - 0.74 A 260 （2）Warburg-Christian 公式 蛋白质浓度（mg/ml）=1.55 A 280 - 0.76 A 260 原理： 评价及应用： 优点：敏感而简便，可保留蛋白生物活性，常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。 缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm测定易受游离色aa和酪aa以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。 措施：在220-225nm波长区域，用0.15mol/l的NaCl稀释1000-2000倍可消除干扰。 7.折光测定法 溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。 原理： 评价及应用： 优点：简便、快速，易掌握，重复性较好，适合临床急诊，体检筛查和胸腹水蛋白质测定。 缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影响，会由于A/G比值变化而产生误差。