NY/T 449-2001玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法.pdf

B 20 NY 中华人 民共和 国农业行业标准 NY/T449-2001 玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法 Identificationpurityofmaizevariety usingsaltinginproteineletrohporesis 2001一08一20发布 2001一11一01实施 中华人民共和国农业部 发 布 NY/T449-2001 前 言 本标准由农业部市场与经济信息司提出。 本标准起草单位:农业部全国农作物种子质量监督检验测试中心、吉林省农作物种子质量监督检验 站、北京市种子质量监督检验站。 本标准主要起草人:辛景树、赵建宗、丁万志、贾希海、黄庭军、王汝宝、刘玉欣、苏菊萍、徐献军、吕小瑞、 王秀荣、孙波、冯晓东、陈雅君、余有海 、班秀丽 。 中华人民共和国农业行业标准 玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法 NY/T 449-2001 Identificationpurityofmaizevariety usingsaltinginproteineletrohporesis 范围 本标准规定了玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度的室内检测方法。 本标准适用于玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度鉴定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有 效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T3543.2-1995 农作物种子检验规程 扦样 GB/T3543.5-1995 农作物种子检验规程 真实性和品种纯度鉴定 GB4404.1-1996 粮食作物种子 禾谷类 3 定义 本标准采用下列定义 I1 种子真实性 供检品种与文件记录 (如标签等)是否相符。 3.2 品种纯度 品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示 [GB/T3543.51 13 育种家种子 育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子、用于进一步繁殖原种的种子。 4 原理 从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酸胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用 下进行分离，通过染色显示蛋白质谱带类型。不同玉米品种由于遗传组成的不同，种子内所含的蛋白质种类有 差异 ，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别 ，从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定 。 5 仪器设备及试剂 5.1 仪器设备 电泳仪((500V士5V连续可调,0^400mA连续可调、额定输出功率200w)、垂直板夹心式电泳槽、单 籽粒粉碎器、天平(感量0.01g,0.001g,0.0001g各一台)、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机((5000r/min 以上)、电冰箱、电炉、离心管(1.5ml)、离心管架、移液管(10mL,Sml-,2mL各两支)、微量进样器((5- 中华人民共和国农业部2001一08一20批准 2001-11一01实施 NY/T449-2001 100VL),恒温箱、观片灯等。 5.2 试剂 丙烯酞胺,N,N一亚甲基双丙烯酞胺、乳酸、乳酸钠、甘氮酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基绿、 基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R250、无水乙醇、正丁醇等(所用试剂均为分析纯，所用水均为去 离子水)。 6 溶液配制 6门 电极缓冲液 称取甘氨酸6.00g，倒人2000mL烧杯中，加人 1800mL去离子水溶解，用2.0mL乳酸调至 pH