桑花叶型萎缩病病原的鉴定植物病理学专业论文.docxVIP

独创：性声。明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成， 独创：性声。明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成， 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包畲其他人已l经发 表或撰写过的研究成果二也不包含为：获得中：国农业科学瞑：攀其它教育机构!的孥位或证： 书而使用过的材料。与我一向工作的。同志对本研究所做的任何贡献均已耷论文：枣作了j 明确的说明并表示了谢意。 研胜擞：马鼋嵌， 时间二动彦年艿肛日 ．关于论文使用i授权的声明I ：0 本人完全了解中国农业科学院帝苯保留-使舟学位论文的规定；-臣艮中国农业科 学院有权保留送变论文的复印袢和磁盘。，。允许论文被查阅和借阅0可以采用影印‘缩‘ 印或扫墒等复制手段保存、汇编学位论文p同枣中国农业科学院可以用不同方式车不 同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 翡：伏 时间：≯，爹．年彩月。日 导师签名： 时间： 确，多年石月)日 万方数据 中国农业科学院 中国农业科学院 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 论文题目 桑花叶型萎缩病病原的鉴定 分子植物病 论文作者 马宇欣 专业 植物病理学 研究方向 理学 指导教师 李世访研究员 培养单位(研究所) 植物保护研究所 硕(博) 姓名 职称 单 位 专业 签名 导师 评 刘玉乐 教授 硕导口 清华大学生命科学学 生物化学与 ＼＼ 博导一 院 分子生物学 阅 硕导口 中国农业科学院植物 ＼＼ 人 王锡锋 研究员 博导一 保护研究所 植物病理学 答 辩 硕导口 中国科学院微生物研 溺噜 主 方荣祥 研究员 微生物学 席 博导一 究所 I 硕导口 中国农业大学农学与 范在丰 教授 博导一 生物技术学院 植物病理学 瑰彩z 硕导口 中国农业大学农学与 韩成贵 教授 博导一 生物技术学院 植物病理学 释瓜尝 答 硕导口 中国农业科学院植物 周雪平 教授 博导● 保护研究所 植物病理学 ＼]4＼ 辩 硕导口 北京大学生命科学学 生物化学与 j锄 李毅 教授 博导一 院 分子生物学 委 V 硕导口 贝 博导口 硕导口 博导口 硕导口 博导口 会议记录(秘书) 张志想 论文答辩时间地点 2015年5月17日上午8：30，植保所第一会议室 万方数据 摘要桑花叶型萎缩病(Mulberry 摘要 桑花叶型萎缩病(Mulberry mosaic dwarfdisease，MMDD)是一种困扰桑树生产长达数十年的 重要病害，感病的桑树会表现出植株矮小、叶片花叶、畸形、皱缩、叶缘卷曲等症状，严重影响 桑蚕产业的发展。虽然对该病害的研究开展了近一个世纪，但对于其病原却至今未明确。鉴于此， 本研究以探究桑花叶型萎缩病的病原为目的，系统的开展研究工作。 首先，选取陕西省安康学院蚕桑科研基地进行样品采集，重点采集表现花叶型萎缩病症状的 桑树样品92份，无症状样品9份。选取感病和健康样品各1份进行高通量测序技术，从感病样 品中检测到2种病毒：双生病毒、线虫传多面体病毒和一种小分子环状RNA，而此健康样品中 未检测到病毒病原物。通过RT-PCR／PCR实验验证了这三种病原物确实存在于感病样品中。 其次，对所有样品中这三种病原物的发生率进行了调查，发现感病的92份样品中，双生病 毒的检出率为92．4％，线虫传多面体病毒的检出率为52．17％，小分子环状RNA的检出率为40．2％。 因此，双生病毒与花叶型萎缩病的发生存在正相关关系；而线虫传多面体病毒的检出率也较高， 与双生病毒可能存在混合侵染的情况存在；由于从健康的样品中也检NNd,分子环状RNA的存 在，因此小分子RNA与病害的发生没有相关关系。我们通过实验得出双生病毒与花叶型萎缩病 具有极大的相关关系，但仍需根据科赫氏法则来进行致病性验证，最终确定是否为该病病原。 最后，鉴于此双生病毒与花叶型萎缩病的相关关系，将其命名为桑花叶型萎缩病相关病毒 (Mulberry mosaic dwarf associated virus，MMDaV)，并对其进行了鉴定。采用PCR法和RCA的 方法克隆得到了双生病毒的基因组全长序列(2952 nt)，单组份，单链环状DNA。除了具有双生 病毒科病毒保守的结构之外，该病毒开放阅读框的个数及位置不同于其他双生病毒，病毒链含有 5个，互补链含有2个，具有独特性。软件预测到互补链存在一个内含子(101 nt)，通过RT-PCR 实验验证了这一预测，并结合高通量数据中存在139个RNA reads以外显子-夕h显子序列方式存在， 进一步证明了体内剪切掉内含子的互补链转录本的存在，根据序列特征判断，该内含子属于U2 型内含子。系统发育分析结果显示，桑树上的双生病毒与柑橘上发现的柑橘褪绿矮缩相关病毒 (Ci