第七章基因表达调控终.pptVIP

与araBAD相邻的是一个复合的启动子区域O1和O2和一个调节基因araC，这个araC蛋白同时显示正、负调节因子的功能。在lac和gal操纵子中，阻遏蛋白只能作为负调节因子，而cAMP-CRP蛋白只能是正调节因子。 araBAD和araC基因的转录是分别在两条链上以相反的方向进行的。在标准的遗传学图谱上，araBAD基因簇从启动子PBAD开始向右进行转录，而araC基因则是从Pc向左转录。 1. araC蛋白的正、负调节作用 2. AraC蛋白的两种形式 AraC蛋白作为PBAD活性正、负调节因子的双重功能是通过该蛋白的两种异构体来实现的。Pr是起阻遏作用的形式，可以与现在尚未鉴定的类操纵区位点相结合，而Pi是起诱导作用的形式，它通过与PBAD启动子结合进行调节。 在没有阿拉伯糖时，Pr形式占优势；一旦有阿拉伯糖存在，它就能够与araC蛋白结合，使平衡趋向于Pi形式。这样，阿拉伯糖的诱导作用就可以解释为阿拉伯糖与Pr的结合，使Pr离开它的结合位点，然后，产生大量的Pi，并与启动子结合。 （a）有葡萄糖，无阿拉伯糖 （b）无葡萄糖， 无阿拉伯糖 （c）无葡萄糖，有阿拉伯糖 3. 营养状态对ara操纵子活性的影响 有葡萄糖，cAMP-CAP没有与操纵区位点相结合，AraC蛋白处于Pr形式并与操纵区A位点结合，RNA聚合酶不能与Pc结合，araC基因虽然仍有转录，但受到抑制，只有少量 AraC蛋白形成，整个系统几乎处于静止状态。 无葡萄糖，也没有阿拉伯糖，因为没有诱导物，尽管有cAMP-CAP与操纵区位点相结合，AraC蛋白仍以Pr形式为主，无法与操纵区B位点相结合，无araBAD mRNA转录。 无葡萄糖，有阿拉伯糖时，大量araC基因产物以Pi形式存在，并分别与操纵区B、A位点相结合，在cAMP-CAP的共同作用下，araC和araBAD基因大量表达，操纵子充分激活。 * * Lac操纵子的本底水平表达 有两个矛盾是操纵子理论所不能解释的。首先，乳糖诱导 物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合，而转运诱导物需要透 过酶，后者的合成有需要诱导。这样解释第一个诱导物的乳 糖如何进入细胞内？ 有两种可能性：A.一些诱导物可以在透过酶不存在时进入细 胞；B.一些透过酶可以在没有诱导物时合成。研究表明，第 二种解释是正确的。 研究发现： 乳糖并不与阻遏物相结合，真正结合诱导物是乳糖的异构体-异构乳糖。 本底水平的永久型合成（background level constitutive synthesis): 在非诱导状态下有少量的lac mRNA的合成，大约每个世代有1~5个mRNA分子。 （β-半乳糖苷异丙基硫代半乳糖苷） 2. 大肠杆菌对乳糖的反应 在本地水平表达时，如加入乳糖，在单个透过酶分子的作用下，少量乳糖分子进入细胞，又单个β-半乳糖苷酶的作用下转变成异构乳糖，异构乳糖结合与P基因上的阻遏物相结合，并使后者失活而离开操纵子，开始转录lac mRNA。这些mRNA编码了大量的β-半乳糖苷酶和乳糖透过酶，其结果导致乳糖大量进入细胞。 3. 阻遏物lacI基因产物及功能 lac操纵子阻遏物mRNA是在弱启动子控制下永久型合成的。未经分级分离的细胞提取物的结合能力大约为每个细胞结合20~40个IPTG分子，因此推测每个细胞中有5~10个阻遏物分子。 （347aa） 4.葡萄糖对lac操纵子的影响 （1）在培养基中同时存在Glucose和Lactose时，lac操纵子表达受阻，没有β-半乳糖苷酶活性； （2）当葡萄糖耗尽完以后，细胞内cAMP浓度增加， β-半乳糖苷酶活性增加。 5. cAMP与代谢物激活蛋白 在腺苷酸环化酶的催化作用下将ATP转变为cAMP， cAMP在真核生物激素调节中起重要作用。 在E.coli中 cAMP浓度受到葡萄糖代谢的调节: (1) 在缺乏碳源培养基中，细胞内cAMP浓度就高； (2) 含葡萄糖培养基中培养，cAMP浓度就低； (3) 只含乳糖或甘油培养基中，cAMP浓度很高。 从上述实验结果可以推测，糖酵解途径中位于葡糖-6-磷酸和甘油之间的某些代谢产物是腺苷酸环化酶的抑制剂。 激活蛋白： 分解代谢物激活蛋白（catabolite activator protein，CAP)是cAMP受体蛋白（cyclic AMP receptor protein，CRP），由crp基因编码，CRP能与cAMP形成复合物; (2) crp基因突变株和腺