二烯丙基三硫对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的防治作用及其机制研究外科学专业论文.docxVIP

中文摘要因子1(B(肌clear 中文摘要 因子1(B(肌clear factor_心，NF．KB)的活化，减少促炎细胞因子n婚．Ⅱ和 IL一1p的生成，表现出一定的抗炎作用。提示DATs对炎症相关性疾病可能 具有潜在的防治作用。因此，本研究用LPs复制小鼠ALI模型，从蛋白激 酶、转录因子、炎性介质的基因及蛋白表达多个层次系统观察了大蒜提取 物的主要活性成分DATs对ALI小鼠的防治作用及其相关分子机制，以期 为ALI／ARDS的防治寻求新的方法。 方法：实验动物选择健康昆明小鼠90只，随机分为5组：(1)ALI组， 腹腔注射LPS(10mg／l喀)；(2)DATS预防组，每天腹腔注射DATs(30mg／l(g) 一次，连续注射7天后，腹腔注射LPs(10mg／I(g)；(3)DATS治疗组，腹腔 注射LPS(10mg／l(g)后30min，腹腔注射DATS(30mg／k曲一次；(4)DATS组， 每天腹腔注射DATs(30mg瓜曲～次，连续注射7天；(5)生理盐水对照组， 腹腔注射等体积生理盐水。体外培养小鼠肺泡巨噬细胞株MH．s细胞，用 不同处理因素，孵育细胞一定的时间。相应实验分组：(1)对照组：细胞 培养基中加入与实验组等体积的生理盐水；(2)LPs组：细胞培养基中加 入LPS(1mg几)；(3)LPS+DATS组：细胞培养基中先加入DArS(O．1mg几， 0．5mg几，2．5mg几，5mg／L)，30 min后加入LPS(1mg几)；(4)DATS组：细 胞培养基中加入DArs(O．1mg几，0．5mg几，2．5mg／L，5mg／L)。测定肺组 织湿重／干重比值(wet／dry weight faito，w仍)，评估肺水肿程度。既染色 (hematoxylin a11d eosin stain，HE stain)，光镜观察肺组织形态学改变。酶 联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbem assay，ELISA)测定血清、 肺组织匀浆及MH．s细胞培养基上清液中盯盯一a、IL一16含量。反转录PcR (reveuse traJlscription PcR，RT-PcR)检测肺组织及MH．S细胞中TNF．cc mRNA、IL一1B瑚RNA、IL一6 mRNA表达，并用Gel_pro凝胶分析软件对 RT-PCR产物进行半定量分析。电泳迁移率改变分析(electrophoresis mobil．tv shiR assay，EMSA)检测肺组织及MH．s细胞中的NF．1出DNA结合 活性。westem blot分析肺组织I佃(iIlllibitoq出)及磷酸化I心 (phospho—11cB，p．11①)蛋白水平及MH．s细胞中IKB、p．IKB、p38激酶及磷 酸化p38激酶(phospho_p38，p．p38)蛋白水平。应用SPssl2．0统计分析软件 进行统计学分析，数据用均数±标准差(i±s)表示，各组均数的比较行单 因素方差分析(analysis of variance，ANOVA)，用最小显著差法(1east sign讯c锄t difference，LSD、作两两比较，PO．05为有显著性差异。 中文摘要 中文摘要 结果： 1 DATS对LPS诱导的ALI小鼠防治作用的整体实验观察 1．1肺W／D变化 ALI组，2h时肺W他较对照组无明显变化(胗O．05)，6h时肺W／D较 对照组显著升高(PO．05)，表明出现肺水肿。6h时，DATS预防组肺W仍 与ALI组相比显著下降(PO．05)，但DATS治疗组与ALI组相比肺W／D 无明显改善(尸O．05)。DATS组肺W／D与对照组相比无明显差异(胗0．05)。 1．2肺组织形态学变化 肺大体观察，对照组及DATS组肺外观均无明显异常改变；ALI组肺 体积增大，呈暗红色，散在有大小不一的红色斑点，切面疏松，有淡红色 液体溢出；DATS预防组较ALI组病变明显减轻，但DATS治疗组较ALI 组无明显变化。光镜观察肺组织形态学改变发现，对照组及DATS组肺组 织结构完整，肺泡间隔无水肿，肺泡腔清晰；ALI组肺泡间隔增宽，腔内 有少许出血、渗出及炎性细胞浸润，肺间质充血水肿，有大量炎性细胞浸 润；DATS预防组肺组织中炎细胞浸润、渗出及出血等形态学变化较ALI 组明显减轻；DATS治疗组较ALI组无明显改善。 1．3血清及肺组织TNF．仅及IL．1B含量变化 ALI组，2h时血清及肺组织中TNF一0【及IL．1D含量明显高于对照组 俨O．01)，6h时n妲一仅及IL．1 p含量有所降低，但仍然高于对照组 (PO．01)。DArS预防组，2h血清及肺组织中耵盯．0【及IL．1 p含量低于 ALI组(PO．05)，6h时含量明显低于AL