独活寄生汤抑制软骨细胞凋亡的机制研究中西医结合临床专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 目录中文摘要 目录 中文摘要 1v Abstract． 。 ． ． ．． ． ， ．． ．．．． 。．．．。．．．． ．．． ．． ．． 。． ． ． 1～7I 中英文缩略词表 Ix 前言卉 ．1 实验一软骨细胞的分离培养及鉴定 3 目的 ． ．3 1实验材料 ． 3 2实验方法与步骤 ．4 2．1软骨细胞的分离、原代培养 4 1．2软骨细胞的传代培养 4 2．3第2代软骨细胞的生长曲线 ．4 2．4软骨细胞的鉴定 ．．5 3结果 ．5 3．1软骨细胞的形态观察 ．5 3．2第2代软骨细胞生长曲线 6 3．3软骨细胞的鉴定 6 4讨论． ． ．．． ． ． ． ． ．．．7 4．】软骨细胞的分离培养 7 4．2软骨细胞的鉴定及生长特点 ．8 5小结 ．8 实验二独活寄生汤对衣霉素诱导软骨细胞内质网应激凋亡的影响一9 Ij自q ． ．．9 1实验材料 ．9 2实验方法与步骤 10 二．1独活寄生汤水提物的制备 10 ：．2 MTT优化TM诱导软骨细胞凋亡的量效关系 ．1 l 2．3‘FM诱导软骨细胞凋亡模型的复制 ．1 l !．4独活哥生汤干预TM诱导软骨细胞凋亡模型的方法 11 1．5独活寄生汤对软骨细胞内质网应激凋亡模型影响的检测 ．1 1 1．6统计学处理 18 3结果 ．19 3．1 TM诱导软骨细胞凋亡的量效关系 ．19 3．2 TM诱导凋亡后软骨细胞的形态观察 。19 3．3独活寄生汤干预TM诱导软骨细胞凋亡模型的效应关系 ．19 3．4独活寄生汤或PBA干预后各组软骨细胞相关基因及蛋白表达 21 3．5独活寄生汤或PBA干预后各组软骨细胞mill一34a的表达 22 万方数据 4讨论 4讨论 23 4．1独活奇生汤浓疗骨关节炎的中医理论． 23 4．2软竹细胞内胍『叫应激凋■模型的建立． 24 4．3独活寄生汤对TM诱导软骨细胞内质|_{：9应激凋亡通路的影响 ．．24 4．4独活寄生汤对TM诱导软骨细胞miR一34a表达的影响 26 5小结 27 实验三独活寄生汤对硝普钠诱导软骨细胞线粒体凋亡的影响 28 目的 28 1实验材料 28 2实验方法与步骤 29 ：．I独活寄生汤水提物的制备 ．29 2．2 M丁r优化$NP诱导软骨细胞凋亡的量效关系 29 2．3 SNP诱导软骨细胞凋亡模型的复制 30 2．4独活寄生汤干预SNP诱导软骨细胞凋亡模型的方法 ．．30 ：．5独活寄生汤对软骨细胞线粒体凋亡模型影响的检测 ． 30 2．6统计学处理 36 3结果 36 3．1 SNP诱导软骨细胞凋亡的量效关系 ．．36 3．2 SNP诱导凋亡后软骨细胞的形态观察 37 3．3独活寄生汤干预SNP诱导软骨细胞凋亡模型的效应关系 37 3．4独活寄生汤干预后各组软骨细胞相关基因及蛋白表达 ．40 4 i刁‘{仓 ． 42 4．1软骨细胞线粒体凋亡模型的建立 42 4．2独活寄生汤对SNP诱导软骨细胞凋亡率的影响 43 4．3独活寄生汤列SNP诱导软骨细胞△、}Jm的影响 43 4．4独活罱生汤对SNP诱导软骨细胞线粒体凋亡通路的影响 44 5小结 ．45 结j沧 46 参考文献 47 致谢 一54 文献综述 55 个人简历 ■ 59 HI 万方数据 中文摘要目的 中文摘要 目的 探讨独活寄生汤抑制软骨细胞凋亡的作用机制。 方法 1．清洁级4周龄SD大鼠，采用机械．酶消化法获取膝关节软骨细胞，进行体外培 养，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，II型胶原免疫组织化学及甲苯胺蓝染色 鉴定软骨细胞，MTT描绘第2代软骨细胞生长曲线。 2．采用不同浓度的衣霉素分别干预第2代软骨细胞24 h，MTT筛选衣霉素较佳作 用浓度，倒置相差显微镜观察诱导后软骨细胞的形态结构，建立软骨细胞内质网应激凋 亡模型；MTT优化独活寄生汤干预软骨细胞内质网应激凋亡模型的浓度及时问；以内 质网应激抑制剂4一苯基丁酸钠盐为阳性对照，倒置相差显微镜观察干预后软骨细胞的形 态结构，DAPI染色检测软骨细胞的凋亡，RT-PCR和Western bbt分别检测软骨细胞 mp、Atf4、Chop、Xbpl、Xbpls、Bax、Bcl-2、caspase一9和caspase一3基因及蛋白表达， 荧光定量PCR检测软骨细胞miR-34a表达。 3．采用不同浓度的硝普钠分别干预第2代软骨细胞24 h，MTT筛选硝普钠较佳作 用浓度，倒置相差显微镜观察诱导后软骨细胞的形态结构，建立软骨细胞线粒体凋亡模 型；MTT优化独活寄生汤干预软骨细胞线粒体凋亡模型的低、中、高浓度及时间，倒 置相差显微镜及扫描电镜观察干预后软骨细胞的形态结构，DAPI染色检测软骨细胞的 凋亡，AnnexinV／PI检测软骨细胞的凋亡率，