id3基因表达在逆转肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用及机制研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

博士生学位论文组织中的表达下调，可促进肿瘤细胞的侵袭和转移。RhoE具有许多重要的功能， 博士生学位论文 组织中的表达下调，可促进肿瘤细胞的侵袭和转移。RhoE具有许多重要的功能， 它可以调节细胞骨架重组和细胞形态，影响细胞增殖、凋亡、分化等。 分化抑制因子(Id)，属于螺旋．环。螺旋(HLH)转录因子家族成员，因缺乏与 DNA结合区域而对碱性t-ILH(bHLH)转录因子起负调节作用。到目前为止， 在哺乳动物中共发现4种Id蛋白，即Idl、Id2、Id3和Id4。近几年的研究表明， ld蛋白家族具有比较广泛的生物学功能，包括：调控细胞命运和细胞定向分化、 维持细胞存活、促进血管、胚胎和器官的形成、诱导细胞发生凋亡及肿瘤侵润 等癌蛋白功能，同时还具备抑制细胞分化和促进细胞增殖的功能。Id蛋白特别 是Idl蛋白，不仅参与正常细胞的生长发育，在许多肿瘤细胞中也呈现高表达， 已有研究发现，Idl在肿瘤细胞中的表达水平与肿瘤细胞的侵袭转移密切相关。 Lwatsuki发现，在发生淋巴结转移和腹腔转移的胃癌患者中，Idl蛋白在骨髓和 外周血中的表达水平要明显高于没有远处转移的胃癌患者，并提出骨髓和外周 血中Idl是监测胃癌发生淋巴结和腹腔转移的“真正的指标”。大量研究已证实 Idl在肿瘤细胞中的表达及表达程度与肿瘤细胞的分化及细胞侵袭能力相关，被 研究者们认为是一种“准癌基因”，因此得到学者们的广泛研究。目前，Idl在 肿瘤中发挥的生物学作用己得到普遍认可，与Idl相比，因为Id3基因表达调控 机制的复杂性决定了其功能的多样性，因此，有关Id3基因在细胞周期调控中的 作用及其作用机制尚有待进一步深入研究。 1991年，有研究学者首次发现了Id3基因，它被称为体外培养小鼠成纤维细 胞过程中血清诱导表达的立即早期基因。Id3的表达既广泛，又有细胞类型的特 异性，决定了其基因调控机理的复杂性。Id3在细胞中的表达模式和调控机制与 Idl不完全相同，在不同种类的肿瘤组织和肿瘤细胞系中，Id3具有截然不同的 表达，在人小细胞肺癌和原发性结直肠癌中表达量较高，而在前列腺癌、卵巢 癌及甲状腺癌中表达水平低下。小鼠Id3基因敲除(Id3。／-)可导致小鼠发生与人 类相似的丫6 T细胞淋巴瘤，提示丫6 T细胞淋巴瘤患者体内可能存在Id3基因的 突变。在我们的前期体外实验研究中发现：@Id3在正常人PBMC中未见表达， Ⅱl 万方数据 中文摘要而在不同肿瘤细胞中的表达程度则有较大差异，在人前列腺癌细胞PC．3M中Id3 中文摘要 而在不同肿瘤细胞中的表达程度则有较大差异，在人前列腺癌细胞PC．3M中Id3 表达水平最高，要明显高于肺腺癌细胞(A549)、卵巢癌细胞(COC2)、Burkitt’S B淋巴瘤细胞(Daudi)、T淋巴细胞性白血病细胞(Jurkat)等；②用间接免疫 荧光试验(m～)对A549、PC．3M和人乳腺上皮癌细胞(MCF7)中Id3蛋白的 表达分布进行检测的结果表明，A549细胞内Id3蛋白表达量要明显低于MCF7 和PC．3M细胞。以上结果表明，Id3的表达是根据其所在细胞的种类和生长发 育阶段的不同而呈现不同的水平，从而执行各种特殊的细胞生物学功能。 据有关文献报道，Id3除了具有促进细胞周期进程，抑制细胞分化的功能外， 在细胞凋亡方面也发挥着极其重要的作用。早在2001年，Kee等就发现通过采 用逆转录病毒载体将Id3导入人B淋巴细胞前体(B lymphocyte progenitors，BLPs) 内，可导致BLPs出现增殖抑制以及凋亡，通过模拟TGF．B的作用，外源性Id3 在BLPs中的过度表达可诱导BLPs发生凋亡现象。最近，Lee等研究也发现， 经过X射线照射的小鼠表皮组织和HaCaT角质形成细胞可以导致细胞内Id3表 达的上调，Id3重组腺病毒在HaCaT细胞中的表达可以诱导细胞发生凋亡，并能 显著增加X射线诱导细胞凋亡的敏感性。我们在前期研究中发现：①将表达载 体pEGFP／Id3导入A549细胞，使EGFP．Id3融合蛋白在A549细胞中得到表达， MTT实验、Annexin V／7AAD．FCM凋亡检测以及Hoechst 33258核染色法结果均 表明，Id3转基因表达可诱导A549细胞发生增殖抑制和凋亡；②用RNA干扰技 术成功构建靶向人Id3基因的miRNA干扰载体(pcDNA／miRId3)，体外抑制A549 细胞中Id3的表达，可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用；③ 将Id3基因克隆至腺病毒表达载体pAxCAwtit，转染293细胞后制备出重组腺病 毒Ad．Id3，结果表明，腺病毒介导的Id3转基因表达可以抑制A549细胞增殖。 以上结果提示，Id3在A549细胞中转基因表达可诱导细胞增殖