茶多酚对脂代谢基因的调控作用及对人群血压影响的荟萃分析内科学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 中国协和医科大学中国医学科学院第三部分 中国协和医科大学中国医学科学院 第三部分 冠脉支架术后应用替格瑞洛对治疗后血小板高反应性的影响 中文摘要 ．． ．82 英文摘要 84 前月U 言舌 ．．．． ．．．． ．．毯／．．87 研究对象与方法 89 结果 ．92 讨{念 ． 100 结论 ． ．． ．． ．．103 参考文献 ．． ．104 综 述 ．． ．1 1 0 缩略词表 128 致 谢 130 个人简历 131 独创性声明 ．133 万方数据 中国协和医科大学中国医学科学院 中国协和医科大学中国医学科学院 博士学位论文 第一部分：茶多酚的降脂作用以及长链非编码RNA对脂代 谢基因的调控作用 中文摘要 研究背景及目的：冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)仍然是威胁人类健康的 重要疾病。血中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)浓度的升高，己被确 认为冠心病发生的最主要危险因素。健康的生活方式，如良好的饮食习惯可预防 高脂血症的发生。绿茶是我国传统饮品，富含茶多酚，其中茶多酚单体表没食子 儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate，EGCG)是绿茶中最具活性的分子。 近年的流行病学研究提示饮用绿茶与心血管疾病死亡风险呈负相关。一些基础研 究表明茶多酚可通过抑制肠道内外源性胆固醇的吸收、增加肝脏LDL受体 (LDLR)表达及活性、调节载脂蛋白的分泌等机制调节血LDL．C水平。但目前 茶多酚对脂质代谢通路基因的直接作用以及可能的分子机制仍不清楚。长链非编 码RNA(10ng nocoding RNA，lncRNA)是一类转录本长度超过200个核苷酸的 RNA分子，能以RNA的形式在多种层面上(表观遗传、转录以及转录后水平) 调控基因的表达，参与了剂量补偿效应、基因组印记、细胞发育分化等重要生物 学过程。目前越来越多的研究揭示了lncRNA在心脏发育和心血管疾病(如冠心 病)中发挥了重要作用，已成为心血管领域研究的新热点。因此，本研究通过生 物芯片技术观察茶多酚EGCG对HepG2细胞脂质代谢通路基因和lncRNAs表达 的影响，并初步探讨IncRNA对脂质代谢通路基因的调控作用。 研究方法：人HepG2细胞经茶多酚EGCG(25肛M)处理24小时后，抽提RNA， 质检合格后杂交至HumanTranscriptomeArray 2．0(HTA2．0)芯片，进行mRNA和 IncRNAs表达谱的分析并筛选出差异表达的基因。筛选标准为倍数变化(fold change)≥1．5且P0．05。通过生物信息学方法对差异表达的lncRNAs进行靶基 因预测，建立lncRNAs和脂代谢相关基因的可能作用关系。为进一步研究 lncRNA对靶基因的调控作用，我们利用RNA干扰技术降低相关lncRNA的表达， 应用实时荧光定量多聚酶链反应和Westernblot检测靶基因的mRNA和蛋白表达 水平改变。 研究结果：表达谱芯片结果显示与对照组相比，茶多酚EGCG处理后有27条 脂质代谢相关基因表达差异具有统计学意义(PO．05)，涉及脂质合成、转运与 分解。其中EGCG可直接影响胆固醇平衡代谢调控的3个关键基因：羟甲基戊 二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、LDLR及乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2) 的表达水平。同时EGCG处理后共有285条lncRNAs表达水平有统计学差异 万方数据 中国协和医科大学中国医学科学院 中国协和医科大学中国医学科学院 博士学位论文 (Po．05)。生物信息学靶基因预测发现5个脂代谢相关基因包括HMGCR和 ACAT2的表达可能受IncRNA的调控，其中lncRNA们^能姐丌∞2∞对HMGCR 表达可能起着顺式调控作用。RNA干扰抑制lncRNAⅣI∞胤姐D刀D2的表达后 接受不同浓度EGCG(0，10，25 gM)处理，HMGCR mRNA和蛋白表达水平均 显著性增高(P0．05)。 结论：茶多酚EGCG可直接影响脂质代谢通路基因的表达，包括在胆固醇平衡 调控中起关键作用的基因．LDLR，HMGCR和ACAT2。同时EGCG可上调或下 调众多的lncRNA。功能研究证实lncRNAⅣ∞删黝∞2叩可抑制HMGCR的 表达。本研究结果提示lncRNAs可能是茶多酚