丹参高亲和性磷酸盐转运蛋白基因的克隆与表达分析遗传学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 丹参(Salvia miltiorrhiza)是我国传统中药，但野生丹参种质资源急剧减少， 无法满足市场需要，因此本实验室近年利用二倍倒k(diploid)与四倍体(tetraploid) 杂交获得三倍体(tfiploid)丹参。经过检测，所得三倍体丹参在器官大小与药用成 分上均表现显著优势。为探究优势产生的机理，一方面我们参考当前关于三倍 体优势产生的分子机理的研究，将研究重点放在基因表达模式的改变上，试图 从不同倍性植株基因表达的差异上找出三倍体优势的原因；另一方面，考虑到 植物生长过程中因磷酸盐在土壤中被多种化合物固定：或形成难溶于水的有机化 合物，土壤中可直接被植物根部吸收的磷酸盐含量极低，但是磷酸盐对植物生 长的作用十分关键，而植物对磷酸盐的吸收起始于根部高亲和性磷酸盐转运蛋 白对磷酸盐的转运，该基因的表达，直接影响到植物对磷的吸收效率。 鉴于以上原因，本文研究将集中于不同倍性丹参：在低磷环境下根部高亲和 性磷酸盐转运蛋白基因在表达上的差异，并且检测了在低磷条件下，生长素信 号通路中关键基因(aux／iaa，tirl，口椰的表达变化，以阐述三倍体优势产生的机 理。主要结果如下： 1从丹参中克隆得到丹参高亲和性磷酸盐转运蛋白基因的cDNA全长，命 名为SmPhtl，已在GeneBank中登记，登录号JQ898683。 2对SmPhtl基因cDNA序列分析表明，该基因全长1467bp，包含1371bp 的开放阅读框，编码含有457个氨基酸的蛋白，属于MFS基因超家族，具有12 次跨膜区域。 3利用RT．PCR的方法分析了SmPhtl在器官中的表达特异性，发现该基因 在根部(root)表达，但在茎(stem)、叶(1eaf)部分几乎不表达。 4利用定量PCR(Real．Time PCR)的方法检测SmPhtl在低磷条件下的表 达，研究结果表明，在适磷条件下，不同倍性丹参中SrnPhtl基因表达量的差别 明显，其中，二倍体表达量较小，而三倍体与四倍体表达量接近，并且均高于 二倍体，幅度约为2倍；在低磷条件下，各倍性中．SmPhtl表达都受到低磷条件 的诱导而上升，上升幅度不同，其中三倍体与四倍体中SmPhtl表达量的增幅接 摘要近，而远高于二倍体，所测定时间为24h，在前12，h内，各倍性丹参SmPhtl表 摘要 近，而远高于二倍体，所测定时间为24h，在前12，h内，各倍性丹参SmPhtl表 达量的上升均不明显，在后12h内，表达量均大幅提升。 5利用定量PCR的方法检测aux／iaa，tirl，arf基因的在低磷条件下的表达， 在植株被诱导12h后，各倍性植株中tir，arf基因表达均下调，下调幅度约为1／2 倍，而aux／iaa表达变化比较复杂，三倍体几乎不变，fig--倍体与四倍体均下调。 关键词：丹参；三倍体优势；高亲和性磷酸盐转运蛋白；Real．time PCR AbstractAbstract Abstract Abstract 勋～ia miltiorrhiza iS the traditional medicine of China．But the wild Salvia miltiorrhiza now cannot meet the need of the market because of the sharp decrease of germplasm resources．Thus，in the recent years the triploid Salvia miltiorrhiza has been got by the hybridization of diploid and tetraploid in the lab．The test shows that the tfiploid Salvia miltiorrhiza has significant advantages on both the organ size and the medical composition．In order to explore the mechanism that the advantages give US，first we should reference the research on the triploid：molecular mechanism from the advantages．The change of genie expression pattem should be the key points of the research and try to find out reason of the triploid advantages from the diffe