表达鼠cxcl13重组狂犬病病毒的构建及免疫原的研究预防兽医学专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 卺 如需保密，解密时间 年 月。 日 独创性声明 J燃掣 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下避行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不翘含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作妁同志对零研究所做的任 何贡献均巴在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名：争明娟 时间：凇f占年彩,El f弓日， 。学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必缀按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校袁权保存提交论文的印制版和电子版， 并提供目录捡索争阏览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业太学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容。为存在馆际合作关系酶兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密，商业秘密或申请专利簪潜在器要提交傣密的论 文)在解整后适用于本授权书。 学位做作者张务硝硐 导黼：奶 签名日期；劲，6年‘月I扣 签名日期：函，Z年么月／t／．日 万方数据 表达鼠CXCLl3重组狂犬病病毒的构建及免疫原性的研究目 表达鼠CXCLl3重组狂犬病病毒的构建及免疫原性的研究 目 录 摘 要 i Abstract ．．ii 缩略语表(Abbreviation) iv 1文献综述 1 1．1狂犬病概述 1 1．2狂犬病病原学 ．1 1．3狂犬病病毒的致病机制和病理变化 ．2 1．4狂犬病的流行病学和防控 ．．3 1．5狂犬病的预防和治疗 4 1．6狂犬病病毒的反向遗传学 ．5 1．7狂犬病毒疫苗的研究进展 ．6 1．7．1传统狂犬病毒疫苗 ．6 1．7．2新型狂犬病毒疫苗 ．7 1．8生发中心 8 1．9趋化因子CXCLl3 ．9 1．10 TFH细胞及其表面分子 。10 2．目的与意义 12 3实验材料与方法 ．13 3．1实验材料 ．．13 3．1．1细胞和病毒 ．13 3．1．2载体与质粒 13 3．1．3主要试剂 13 3．1．4相关试剂及配制 ．14 3．1．5主要仪器 l 5 3．1．6实验动物及手术器械 15 3．2实验方法 16 3．2．1鼠PMBCs的分离及CXCLl3基因的克隆 16 3．2．2 LBNSE．CXCLl3感染性克隆的构建 19 万方数据 华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文3．2．3 华中农业大学2016届硕士学位(毕业)论文 3．2．3 LBNSE．CXCLl 3的拯救 ．21 3．2．4 LBNSE．CXCLl3感染性克隆的鉴定 21 3．2．5 LBNSE．CXCLl3的扩增 ．22 3．2．6 LBNSE．CXCLl3毒价的测定 ．．23 3．2．7 LBNSE．CXCLl3在细胞上的生长特性 23 3．2．8 LBNSE．CXCLl3体外bmDC激活情况 。23 3．2．9 LBNSE-CXCLl3感染小鼠后DC、TFH和GC B细胞激活检测 24 3．2．10 LBNSE．CXCLl3对小鼠致病性检测 ．26 3．2．11 LBNSE．CXCLl3免疫小鼠后中和抗体检测 ．26 3．2．12 LBNSE．CXCLl3对小鼠保护率检测 ．26 3．2．13 FAVN法检测狂犬病病毒中和抗体 26 4结果与分析 28 4．1 LBNSE．CXCLl3感染性克隆的构建 ．28 4．2 LBNSE．CXCLl3的检测 ．29 4．3 LBNSE．CXCLl 3体外生长特性 ．．30 4．4动物实验 ．30 4．4．1 LBNSE．CXCLl3对小鼠致病性检测 30 4．4．2 LBNSE．CXCLl3免疫小鼠后中和抗体水平检测 31 4．4．3 LBNSE．CXCLl3对小鼠的保护率检测 33 4．5 LBNSE．CXCLl3对小鼠DC的激活检测 34 4．5．1 LBNSE．CXCLl 3对小鼠bmDC的激活检测 ．34 4．5．2 LBNSE．CXCLl3对小鼠体内DC的激活检测 36 4．6 LBNSE．CXCLl3对小鼠TrH和GC B细胞激活检测 39 5讨论 42 6结论 45 参考文献 。46 致谢 ．55 Ⅱ 万方数据 表达鼠CXCLl3重组狂犬病病毒的构建及免疫原性的研究摘要 表达鼠CXCLl3重组狂犬病病毒的构建及免疫原性的研究 摘要 狂犬病(Rabies)是一种严重危害人和动物的烈性传染病，分布在全世界约150 个国家。到目前