hanac1基因转化马铃薯研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

摘要马铃薯(Solarium 摘要 马铃薯(Solarium tubervsum L．)作为宁夏优势特色产业之一，对于促进当地区域经济健康发 展起着重要的支撑作用。但马铃薯种植区多位于无灌溉、生态脆弱地区，干旱、盐渍等非生物胁 迫严重影响马铃薯的产量与品质。植物的抗逆性属于复杂的数量性状，加之马铃薯属于同源四倍 体植物，遗传背景狭窄，常规杂交育种短时期内很难创制出优良品种。基因工程育种技术的发展， 为改良马铃薯抗逆能力，仓JSU抗逆新品种提供了有效的途径。NAC转录因子参与植物形态建成， 通过与DNA元件的结合调控下游一系列基因的表达，对非生物胁迫应答，尤其是对盐、干旱胁 迫发挥着重要调节作用。因此，利用基因工程技术改良马铃薯的抗逆性，创制抗逆新品种具有重 要研究意义。 本实验以我区主栽马铃薯品种“陇薯3号”、“大西洋”、“费乌瑞它”、“夏波蒂”、“青薯168” 和“黑美人”的叶片和茎段为材料，建立优化了离体再生体系和微型薯高效液体培养体系；采用 正交设计研究了遗传转化体系中各影响因素的最佳水平，并确立了最优组合。在此基础上，利用 农杆菌介导法将前期克隆得到的梭梭(Haloxylon ammodendron)HaNACl基因进行了马铃薯转化、 阳性植株鉴定和抗逆株系筛选研究。主要研究结果如下： 1．以6个品种的叶片和茎段为外植体，研究了植物激素组合对愈伤组织诱导率、愈伤组织分 化率及出苗率的影响程度。结果表明：MS培养基中添加0．1 mg．-L 52，4．D+I，0 nag—L 16．BA对愈伤 组织诱导效果最佳，6个品种叶片愈伤组织的诱导率达73．3％．93．3％，茎段愈伤组织的诱导率达 90．0％-100％。添加0．5 mg·L。1GA+2 mg—L 16．BA+3mg-L。1ZT可显著地促进茎段愈伤组织分化及出 苗，其中，“陇薯3号”、“大西洋”的分化效果最佳，出苗率分别达到了175．0％和140．0％； 2．确立了MS培养基中添加2 mg—L 16一BA为试管薯诱导、生长的最佳液体培养体系。与固体 培养体系相比，该体系大大缩短了诱导周期，结薯数量多且直径大。同时，研究并建立了以试管 薯薄片为外植体的马铃薯高效受体体系，再生周期仅为20-30d。薯片在培养基(MS+I．0 mg‘L‘1zT+1．0mg‘L’1IAA+0．5mg·L一6BA+0．2rag‘L‘1GA)上出苗效果最好，其中“青薯168”出苗率 最高，达到110％，“黑美人”次之为77．8％。 3．利用农杆菌介导法将HaNACl基因转化马铃薯，进行4因素3水平L9(34)的正交试验， 研究结果表明，品种为“大西洋”，卡那霉素选择浓度30 mg·L～、菌液浓度OD600 1．0，浸染时间 15 min，为最佳转化方案，转化率为35．9％。 4．实验共筛选出220株抗性芽，112株通过了生根筛选，经PCR及RT-PCR检测：转基因阳 性株系共55株，阳性转化率达到49．1％：从中抽取7株进一步进行PCR-Southem blot，结果验证 外源肠小Wa基因成功的整合到受体材料基因组中。 5．以PEG．6000和NaCl分别人工模拟旱胁迫和盐胁迫，对受体材料和阳性转基因株系进行形 态、生长指标调查。结果表明，有6株阳性转基因株系的抗旱性和耐盐性显著高于对照。生理检 测结果进一步表明在逆境胁迫处理下，外源HaNACl基因的导入能显著地提高马铃薯转基因植株 的抗逆性。 关键词：马铃薯，HaNACl基因，遗传转化，阳性株系 万方数据 AbstractPotato(Sotanum Abstract Potato(Sotanum tuberosum三．)is main advantageous characteristic cultivars ofNingxia agricultural， it plays important supporting role to promoting the health development of the local regional economic．But the potato growing were located in the non·irrigated and ecologically fragile abiotic stress such drought，salinity and affects the yield and quality of potato seriously．The development of genetic engineering breeding technology provides effective way to improve anti-adversity ability and c