对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白vp28枯草工程菌的构建与vp28卵黄抗体的制备及其抗病性研究动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：橹佑材矛 签字同期：五归扩年易月占日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝姿盘堂 有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和 借阅。本人授权逝姿态堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：僻辨谚眯 导师签名： ∽ 签字日期：加矿年6月6日 签字日期：加矿年 多月占日 浙江大学博士学位论文目录 浙江大学博士学位论文 目录 摘要 ． ． ．．． ． ． ． ．．．．．．．．． ．． ． ． ．1 Abstract ． ． ．． ． ．．．．．．．．． ． ． ． ． ． ．．．． 4 常见英文缩写词 ．．． ．．． ．．． 7 弓I言 ． ．．。 ． ． ． ．． ．。 ． 。8 第一章文献综述 ．10 第一节对虾白斑综合征病毒研究进展 lO 1对虾白斑综合征病毒概况 ．．10 2对虾白斑综合征病毒结构蛋白的研究 ．．1 l 2．1 WSSV结构蛋白 ll 2．2囊膜蛋白的结构与功能 12 2．3囊膜蛋白VP28晶体结构 14 3对虾白斑综合征病毒致病分子机理 ．．15 4对虾白斑综合征病毒防治新进展 ．．17 4．1亚单位疫苗 l 7 4．2特异性中和抗体 18 4．3 siRNA基因干涉 ．1 8 第二节甲壳动物的免疫系统与免疫因子 19 l血淋巴的主要组分及其作用 ．．19 2凝固反应系统(Clotting system) 20 2．1 LPS介导的凝固连锁反应 20 2．2 l，3-13．D．葡聚糖介导的凝固连锁反应 ．．20 2．3凝固连锁反应的调控 。20 3凝集素(Lectin)家族 2l 4酚氧化物酶原激活系统(proPO) 21 5其它防御分子 。21 6特异性免疫识别 22 第三节枯草芽孢杆菌作为基因工程宿主菌研究进展 22 l枯草芽孢杆菌蛋白分泌机制 ．23 1．1 Sec-SRP途径 ．23 1．2 Tat途径 ．25 1．3 ABC转运通道 ．25 1．4提高枯草芽孢杆菌蛋白分泌能力的策略 ．．26 2枯草芽孢杆菌芽孢形成过程及孢衣蛋白的组装 ．．29 2．1芽孢形成关键事件 ．．29 2．2芽孢结构与孢衣蛋白组成 ．．29 2．3孢衣蛋白的组装 30 2．4孢衣蛋白——芽孢表面展示系统的装载蛋白 ．．30 3枯草芽孢杆菌作为药用蛋白生产与递呈系统的研究 ．．31 第四节卵黄抗体(IgY)的结构特性与应用 ¨¨ 一32 l卵黄抗体的形成 ．．32 2卵黄抗体的热稳定性和酸稳定性 ～ 一33 目录 目录 浙江大学博士学位论文 3卵黄抗体的结构．．． ．．34 4卵黄抗体的分离与纯化 ．．34 5卵黄抗体的作用机理 ．．35 6特异性卵黄抗体的应用与展望 ．35 第二章以p_葡聚糖酶为报告基因的新型枯草芽孢杆菌分泌表达载体的构建及分泌效率研 究 。。． ． 。 ． ． ． ． ． ． 38 第一节基于强启动子的穿梭型分泌表达载体的构建 39 1试验材料 一39 1．1宿主菌和载体 39 1．2酶、抗生素和试剂 。39 1．3培养基及主要化学试剂的配制 ．．39 2试验方法 一40 2．1引物设计 ．．40 2．2 PCR扩增启动子．信号肽序列 ．．40 2．3 PCR产物PCR／BPS纯化 ．．4l 2．4双酶切PCR／BPS片段与pBEC载体 。4l 2．5连接 41 2．6 CaCl2法制备E coli TOP 10F’感受态 。41 2．7 E coli TOP 10F’转化 ．42 2．8质粒抽提 ．．42 2．9重组质粒鉴定和测序 ．．42 3结果与分析 ．．42 3．1启动子．信号肽片段的克隆 。42 3．2双酶切PCR／BPS片段及载体pBEC线性化 ．42 3．3且subtilis．E coli穿梭分泌性表达载体pBES全序列 43 3．4 pBES载体启动子．信号肽序列分析 45 4讨论 ．．45 第二节p．葡聚糖酶报告基因的分泌表达及分泌效率研究 ．47 1试验材料 ．．47 1．1宿主菌和载体 47 1．2酶和试剂 ．47 1．3培养基及主要化学试剂的配制 47 2试验方法 ．49 2．1 PCR扩增B．葡聚糖酶成熟肽基因mHG ．49 2．2酶切、连