tpo过表达介导的异常骨髓微环境在白血病细胞干性维持中的作用细胞生物学专业论文.docxVIP

中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文结果：成功构建pCDH．EFl．TPO．T2A．copGFP慢病毒载体，包装病毒，感染间充质 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文 结果：成功构建pCDH．EFl．TPO．T2A．copGFP慢病毒载体，包装病毒，感染间充质 干细胞。WB检测到过表达TPO的间充质干细胞胞内有TPO的表达，空载体组也 有微弱的内源性的表达，免疫荧光共聚焦检测TPO大部分定位在细胞浆内，ELISA 检测过表达TPO的间充质干细胞TPO的分泌水平显著高于空载体组。与过表达TPO 的间充质干细胞共培养的TF一1细胞的GO期显著高于对照组；用VPl6处理TF．1 细胞时，与过表达TPO的间充质干细胞共培养的TF．1细胞在24h和48h细胞凋亡 比例均显著低于对照组，表现出更强的抗化疗杀伤；TPO水平的升高对TF．1细胞 的增殖能力无明显影响；与表达TPO的间充质干细胞共培养的TF．1细胞的G0／G1 期比例高于对照组，S期比例低于对照组。在免疫缺陷小鼠体内重建异位人骨髓微 环境实验结果显示，用HPL和FBS培养的MSC均呈现长梭形成纤维样细胞结构， 均具有多向分化能力；两种体系培养的MSC免疫表型无明显区别，但用人血小板 裂解液培养的MSC具有更强的增殖能力和向成骨分化能力；用人血小板裂解液培 养的MSC具有在体内形成骨组织样结构的能力，成功构建小鼠体内的人的小骨模 型。 结论：间充质干细胞TPO表达水平的升高可增加白血病细胞GO期比例，维持其静 息从而使其更能抵抗化疗药物的杀伤。HPL培养的MSC具有更强的增殖能力以及 成骨分化潜能，它能在NOD／SCID鼠上重建异位的人源骨髓微环境。 关键词：骨髓微环境；骨麓间充质干细胞；人血小板裂解液(HPL)；血小板生成 素(TPO)；白血病细胞；静息；耐药性 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文Abstract 中国医学科学院北京协和医学院(清华大学医学部)硕士学位论文 Abstract The Role of TP0 mediated abnormal BM niche in the stenmess maintenance of leukemia ceHs Objective：Abnormal BM niche participates in the initiation and development of leukemia，leukemia cells also can remodel the BM niche．In our previous research，we found that the TPO expression level in BM plasma of AML patients was higher than that in normal donors，which suggesting that the abnormal increase of TPO protein level may correlate with AML．In order to further demonstrate the role of abnormal BM niche in the stemness maintenance of leukemia cells and in the initiation and development of leukemia，we transfected mesenchymal stem cells with TPO and studied the role of abnormal BM niche in the sternness maintenance of leukemia cells in vitro．Furthermore， we applied the tissue engineer technology to construct ectopic human bone malTOW niche in immunodeficiency mouse．This new model was then used to study the role of TPO mediated abnormal BM niche in the initiation and development of leukemia． Methods：The lentivirus vector carrying eDNA of TPO gene and the empty lentivirus vector were constructed and infected into HPL cult