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铅对大鼠背根神经节细胞钙电流的影响姜允申 肖 铅对大鼠背根神经节细胞钙电流的影响 姜允申 肖 杭 戴晓青 (南京医科大学毒理教研室, 南京 210029) 外来化合物在机体内的生物转运和生物 转化过程与细胞膜密切相关, 而细胞膜的正 常结构对维持细胞正常的生理功能和信息传 递又至关重要, 因此外来化合物在机体内转 运与转化过程中是否会导致膜损伤 ( 结构或 功能上) 近年来引起关注。 钙离子的生物学作用近年来研 究 很 深 入, 钙已作为体内第二信使之一, 细胞内游离 钙在完成信息传递过程中起着重要作用1 , 但 C a2+ 浓度的变化呈稳态状, 当这种稳态状 况发生改变时, 可引起一系列复杂的机体生 理活动异常。现已知 C a2+ 不仅沟通细胞之间 的信息流通, 还调节细胞的许多基本活动, 包 括细胞运动、增殖、更新及生殖细胞受精过程 等。 本次研究试图通过膜片钳技术研究铅对 神经细胞钙通道电流的作用, 来阐明铅对细 胞内钙稳态的影响。 1 材料与方法 111 材料 11212 全细胞电压钳记录 记录玻璃微电极用细胞内液充灌, 电极 电阻 2～ 4M 8 , 尖端直径 1～ 2Λm , 在电极拉 制 仪 (N a r ish ige P P 283 ) 上 拉 制 后 在 抛 光 仪 (N a r ish ige M F 283) 上抛光后使用。记录时最 大滤波频率为 5kH z。 所记录细胞直径为 10 ～ 27Λm , 封 接 过 程 中 在 计 算 机 (M ac in to sh 7100) 监控下进行, 用负压吸住细胞, 缓慢加 大负压使电极尖端与细胞封接, 直至封接电 阻达 1G8 以上, 然后用负压吸破细胞, 破膜 后患联电阻一般仍在 1G8 以上, 检测有较大 内向膜电流再进行下一步实验。 记录高阈值 C a2+ 电流钳位电压为- 40mV , 刺激电 压 从 40mV 起至 30mV , 阶跃 10mV 。 膜电流经 - 放 大 器 ( E PC 29, H E KA , Ge rm an y ) 放 大, P u lse+ P u lsef it 软件采集系统采样并储存在 计算机中, 用 IGO R 处理资料。全部实验在室 温 22～ 27℃进行。所有数据用均数±标准差 表示, 统计处理用 t 检验。 2 结果 11111 试剂 醋酸铅 (M e rck ) , 胶原酶 (S ig2 低浓度 P b 2+ 即对钙通道有抑制作用, 211 0101Λm o l/L P b 2+ 使钙电流 ( ICa ) 峰值减小 7 ±118% ( n = 7 ) , 011Λm o l/L P b 2+ 使 峰 值 减 小 4015 ±813% (n = 7) , 1Λm o l/L P b 2+ 使峰 值减小 91±1112% (n = 7)。P b 2+ 作用的阈浓 度为 0101Λm o l, 最大作用浓度为 1Λm o l/L , 在 此 剂 量 范 围 内 P b 2+ 对 钙 电 流 的 作 用 随 P b 2+ 浓 度 的 升 高 而 增 大。 1Λm o l/L P b 2+ 使 C a2+ 电流的持续部分减小 7210 ± 1315% ( n = 7) , 011Λm o l/L P b 2+ 使持续部分减小 2613 ± 511% (n = 7) , 0101Λm o l/L P b 2+ 使持续部 m a ) , 胰 蛋 白 酶 ( S igm a ) , 四 乙 胺 ( T EA S igm a ) , GT P 2N a2 (S igm a) , A T P (S igm a) , 尼 非 地 平、C sCL 、C sO H、H E P E S ( S igm a ) , DN a se (上海实生细胞生物制品公司) , T T X (河北省水产研究公司)。 11112 实验动物 健康 成 年 大 鼠 ( 100～ 150g ) , 雌 雄 兼 用 (江苏省实验动物中心)。 112 方法 11211 背根神经节 (D R G) 神经元的分离。 工业卫生与职业病 ·93·化工劳动保护 2000 年第 21 卷第 3 期分减小 ·93· 化工劳动保护 2000 年第 21 卷第 3 期 分减小 613±013% (n = 7)。P b 2+ 作用的阈浓 度为 0101Λm o l/L , 最大作用浓度为 4Λm o l/ L , 使电流减小 90% 以上 (n = 7)。P b 2+ 作用起 效很快, 经冲洗后钙电流部分恢复。 212 铅对峰值的抑制作用明显大于对持续 部分的抑制作用。由于细胞的体积差