体内获得性耐药进程中白念珠菌表型和基因表达变化的研究皮肤性病学专业论文.docxVIP

目录中文摘要 目录 中文摘要 ．X 英文摘要 ×I 第一章体内获得性耐药进程中白念珠菌表型变化的研究 3 1． 实验材料 一3 1．1． 实验菌株 ．．3 1．2． 主要试剂及培养基配方 ．．3 1．3． 主要仪器 一5 2． 实验方法 一5 2．1． 菌落形态以及光学显微镜镜下结构 一5 2．2． 透射电镜观察菌株超微结构 一6 2-3． 观察实验菌株的菌丝形成能力 一6 2．4． 表面疏水性(CSH)实验 ．6 2．5． 絮凝实验 ．．7 3． 实验结果 ～7 3．1． 观察菌落形态以及光学显微镜镜下结构 7 3．2． 透射电镜观察菌株超微结构 一8 3．3． 比较实验菌株间的菌丝形成能力的差异 8 3．4． 表面疏水性(CSI-I)实验 9 3．5． 絮凝实验 10 4． 讨j仑 一10 第二章体内获得性耐药进程中白念珠菌生物膜形成能力及其药物敏感性变化的研究 ．13 第一节体内获得性耐药进程中白念珠菌生物膜形成能力的研究 ．13 V 万方数据 1． 1． 实验材料与仪器设备 13 1．1． 实验菌株 13 1．2． 主要试剂及培养基配方 13 1．3． 主要仪器 14 2。 实验方法 14 2．1． 白念珠菌生物膜制备 14 2．2． 倒置显微镜观察比较各菌株生物膜生长情况 ．14 2．3． 共聚焦激光扫描显微镜下生物膜结构观察 ．15 2．4． 白念珠菌生物膜活力测定 15 3． 实验结果 15 3．1． 成熟白念珠菌生物膜外观形态 15 3．2． 倒置显微镜生物膜结构观察 15 3．3． 共聚焦激光扫描显微镜生物膜结构观察 ．17 3．4． 白念珠菌生物膜活力测定 18 4． 讨{仑 一19 第二节体内获得性耐药进程中自念珠菌药物敏感性变化的研究 。21 1． 实验材料 ．21 1．1． 实验菌株 21 1．2． 主要试剂及培养基配方 21 1．3． 主要仪器 21 2． 实验方法 21 2．1． 生物膜形成用菌悬液制备 22 2．2． 96孔组织培养板生物膜制备 ．．22 2．3。 白念珠菌药物敏感性测定 22 3． 实验结果 24 V 万方数据 3．1． 3．1． 悬浮状态白念珠菌药物敏感性测定结果 ．24 3．2． 生物膜状态白念珠菌药物敏感性测定结果 ．24 3．3． 实验菌株对受试药物敏感性判读 25 4． 讨论 一25 第三章实验菌株转录组测序和分析 ．28 1． 实验材料 28 1．1． 实验菌株 28 1．2． 试剂与仪器 28 2． 实验方法 29 2．1． RNA提取 29 2．2． 文库构建 29 2．3． 簇生成(TruSeq PE Cluster Kit v3·cBot-HS) 29 2．4． 上机测序(TruSeq SBS Kit v3-HS) 一29 2．5． 数据分析 29 3． 实验结果 30 3．1． 过滤后的数据量 30 3．2． 测序数据与参照基因组比对 31 3．3． 用药前敏感株和用药后高度耐药株基因表达的差异 ．31 3．4． 相关性分析 32 3．5． 差异基因的GO功能富集分析 ．34 3．6． 差异基因的生物学通路分析 34 4． 讨论 ．．35 全文小结 41 综j莶 ．．43 在读期间发表文章 49 万方数据 在读期间参与会议 在读期间参与会议 50 在读期间参加培训 50 致谢 ．．51 独创性声明 53 万方数据 缩略语ATCC 缩略语 ATCC American typeculure collection 美国标准生物品收藏中心 and Laboratory CLSI cli鼍ical s伽1dards临床实验室标准化委员会 Institute CFU colony forming unit 菌落形成单位 S susceptible 敏感 R resistant 耐药 SDD susceptible dose dependent 剂量依赖性敏感 cDNA complementary DNA 互补DNA C．albicans Candida albicans 白念珠菌 SDA sabourand’S Agar 沙氏培养基 YPD Yeast Peptone Dextrose 酵母浸出粉胨葡萄糖 CSH cell surface hydrophobicity 细胞表面疏水性 VOC voriconazole 伏立康唑 FLC fluconazole 氟康唑 AMB amphotericin B 两性霉素B ITR itraconazole 伊曲康唑 CAS caspofungin 卡泊芬净 XTT 2二3‘bis(2。memoxy。4-intro-5。sulfophenyl’ 甲基四氮盐 ．2H．tetrazolium．5．carboxanilide