产热脂肪细胞aldhlal细胞分泌物对白色脂肪神经支配及轴突生长的调控作用外科学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 产热脂肪细胞(Aldhlal-／-细胞】分泌物对白色脂肪神经支配及轴突生长的调控作用 3．Aldhlal乒产热脂肪细胞较WT细胞表达较高水平的Ppary，Paparu，Ucp2， EPHA4，EFNA5，Itga3，Plcel，Sema3d，Sema3e，Adamts9。而Gna01，Gngll， Hhip，Slit2的基因表达下调。 结论： Aldhlal4产热脂肪细胞同WT细胞在脂肪动员，产热及神经生长相关基因表达 上有很大的不同，同产热及神经生长相关的基因在Aldhlal4产热脂肪细胞中高表达。 而这些不同则可能同Aldhlal士小鼠能够对抗肥胖相关。 第二部分LTA(1ipolysis and thermogenesis related)促进轴突生长 因子对神经生长的调控作用的体外及体内研究 目的：肥胖小鼠(高脂饲料诱导及基因型肥胖)体内LTA促进轴突生长因子表 达较正常体重小鼠是否受损；检测LTA促进轴突生长因子在体外及体内是否均能够 有效地调控神经生长。 方法： 1．设置三组实验动物：A．4月龄的WT小鼠(n_14)，喂养常规饲料。B．3月龄 的肥胖饲料诱导的肥胖WT小鼠购自Jackson Laboratory，继续喂养高脂饲料3周 (n=11)。C：3月龄的基因型肥胖Ob／Ob小鼠购自Jackson Laboratory，继续喂养高脂 饲料3周(n=11)。处死小鼠后，取iAb，提取mRNA行NanoString检测。比较不同 组别间LTA促进轴突生长因子表达的差别。 2．取12—16周龄成年雌性wT小鼠脊神经节(DRG，dorsal root ganglion)，行原 代细胞培养。原代细胞培养成功后，设立5组干预条件：A：DRG+丰0经培养液组， B：DRG+NT-3(1ng／m1)+神经培养液组，C：DRG+NGF(10ng／m1)+神经培养液组， D-DRG+WT细胞(或E：Aldhlal小细胞)分化培养后第五天培养液+神经培养液(1：1 混合)组。细胞孵育24小时后，比较各组问神经生长情况。 3．18只3月龄wT雌性小鼠，高脂饲料喂养90天。APLL微胶囊的制作过程如 下所述。然后，小鼠随机分为4组：对照组(注射lml PBS进iAb，n_5)：空微胶 囊组(注射lml空微胶囊进iAb，n=3)；包裹wT细胞的微胶囊组(含有0．5106个 WT细胞的微胶囊lml PBS注入iAb，n=5)；包裹Aldhlal4产热细胞的微胶囊组(含 lI 万方数据 兰垫堕堕塑!旦!垒坐!!!±塑堕!坌鲨塑塑皇鱼堕堕塑丝茎里墨塑墨竺堡塑塑垄堡旦 兰垫堕堕塑!旦!垒坐!!!±塑堕!坌鲨塑塑皇鱼堕堕塑丝茎里墨塑墨竺堡塑塑垄堡旦 生塞塑至 有0．5幸106个Aldhlal4细胞的微胶囊lml PBS注入iAb，n=5)。PBS，空微胶囊，包 裹细胞的微胶囊被注射入小鼠lAb后，继续高脂饲料喂养80天。处死后收集含有微 胶囊的iAb行蛋白组学分析及免疫组化检查。 结果： 1．在肥胖小鼠(高脂饲料诱导或基因型胖肥胖小鼠)体内，LTA促进轴突生长 因子的表达较正常体重小鼠受到明显抑制。 2．Aldhlal斗共培养的神经细胞(E组)，神经细胞生长情况远远超过传统神经分化 诱导剂NGF及NT3。 3．被胶囊包裹的Aldhlal乒产热脂肪细胞而非wT成熟脂肪细胞激发了微胶囊 周围Pefiphefin的表达。蛋白Peripherin的表达量在注射了Aldhlal小产热脂肪细胞胶 囊的iAb内比在注射了空胶囊的iAb内有显著提高。HT也在注射了Aldhlal士产热脂 肪细胞胶囊的iAb内有表达，而在注射了wT成熟脂肪细胞的iAb的胶囊附近却没有 表达。 结论：LTA促进轴突生长因子在肥胖小鼠体内的表达受损；LTA促进轴突生长因 子在体内及体外均能有效调控神经生长。 第三部分RAR(视黄酸受体)对L1A促进轴突生长因子表达的影响 及肥胖与受损的LTA的关系 目的：探讨ALDHlAl的催化产物RA(RA)对LTA促进轴突生长因子表达的 影响及肥胖与受损的LTA促进轴突生长因子的关系。 方法： 1．孵育DRG细胞，分为两个组：A．培养液为神经细胞培养液+Aldhlal壬产热脂肪 细胞分化培养液(体积比：1／1)。B．培养液为神经细胞培养液+Aldhlal小产热脂肪细胞 分化培养液(体积比：1／1)+RA(100nM)。RA在Aldhlal士产热脂肪细胞开始分化后 即刻，第二天，及第五天加入。第六天，XTI显微镜观察神经细胞形态。 2．3T3．L1细胞分化后，加入或不加入Raid(30nM)。NanoString检测细胞中基因 表达水平(S