内含特定pik3ca基因突变检测质控物的研制及其应用的研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

method method is amplified block mutation system method(ARMS)．Conclusion：This study successfully established the artificial preparation containing specific PIK3CA gene mutation detection method of quality control to the quality evaluation between pre—research and applied to the chamber；Develop quality content than clinical pathological sample source wide，more stable，heterogeneity is small，easy to a lot of preparation，can be effectively used to measure the PIK3CA gene mutations between quality evaluation；Room 20 1 5，according to the results of quality evaluation pre-research in each lab samples on the overall coincidence rate is not high，false positive and false negative results has always been the major problems affecting mutation detection accuracy． Key Words PIK3CA；mutations testing；proficiency test；targeted treatment III 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 2 第一章弓I言 一6 第二章材料和方法 ·lo 2．1实验材料和试剂配制 10 2．2方法 ·15 2．2．1细胞系的复苏及培养 ··15 2．2．2细胞系基因型的验证 ·16 2．2．3参考物质的制备及验证 ··23 2．2．4样本均匀性和稳定性的验证 ··26 2．2．5室间质量评价预研样本盘的构建 ··28 2．2．6室间质量评价预研 ··28 第三章结果 29 3．1细胞系复苏及培养 ·29 3．2．细胞系基因型的验证结果 ·31 3．3室间质评预研样本基因型的验证及样本盘的构建 ·34 3．4样本均匀性和稳定性的验证 ·41 3．5室间质量评价预研回报结果 ·44 第四章讨论 ·47 第五章结论 ·50 参敬献 51 文献综述 59 英文缩略词表 72 万方数据 附录 附录 74 在读期间发表的主要学术论文 ．．8l 鹫嘣 82 学位论文原创性声明与版权使用授权书 ·．83 万方数据 内含特定PIK3CA基因突变检测质控物的研制及其应用研究引言 内含特定PIK3CA基因突变检测质控物的研制及其应用研究 引言 磷脂酰肌醇．4．5一二磷酸盐．3．激酶催化亚单位 a (phosphatidylinositol-4．5-bisphosphate一3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA)是 一种癌基因，定位于人3q26．3，全长34Kb，其mRNA由21个外显子组成。PIK3CA 基因编码认类磷脂酰肌醇3激酶的p110催化亚基【11。P13Ks是一组蛋白多聚体， 这些多聚体分别为I、II和III三类。I类蛋白包括两个亚单位：认和IB，其中队 具有类脂激酶和蛋白激酶双重活性，是由催化亚基p110和调节亚基p85组成的二 聚体蛋白【21。大部分P13Ks成员的催化亚基拥有相似的四个结构域，分别为催化激 酶区、螺旋区、C2区和Ras结合区，其N端可以与调节亚基结合，而调节亚基p85 具有2个同源SH2结构域，其中一个可以和上游具有SH2结构的受体酪氨酸激酶 (receptor tyrosine kinase，RTK)结合，另一个SH2结构则可以和催化亚基结合， 从而活化P13Ks【3】(图1．1)。EGFR是第一类RTK，其信号途径下游的基因突变 会使患者对EGFR．TKIs治疗产生耐药性。帕替尼、曲妥珠单克隆抗体等TKIs均 通过直接抑制EGFR从而发挥抗肿瘤作用，可显著改善乳腺癌等患者的生存率和 生活质量。P13KCA基因是位于EGFR下游级联信号通路上的一个重要的激酶分子， 其基因外显子发生突变时，导致基因激酶区域激活，从而使EGFR抑制剂无效。 约有40％的乳腺癌病人肿瘤组织DNA携带PI