低氧参与uuo大鼠肾损伤的作用机制及干预的实验研究内科肾脏病学专业论文.docxVIP

复旦太学博上生毕业论空 复旦太学博上生毕业论空 摘要 中文摘要 第一部分 低氧参与UUO大鼠肾损伤作用机制的研究 背景和目的：进展性肾脏病(progressive renal disease PRD)进行性发展的机制 目前仍不清楚。近几十年来，各国‘肾病学者们一直致力于PRD进展机制的研究， 试图寻找其中是否存在共同的机制。上世纪末英国学者Fine提出的“漫性低氯 学说”(chronic hypoxiahypothesis)逐渐弓f起了肾脏病学界的重视．这一学说提出 小管间质部分的慢性氧缺失是促进肾脏疾病进展和纤维化的重要原因，造成氧缺 失的基础则是球后毛细血管网的不断受损和减少。近年来的研究也证实小管损 伤、闯质纤维化与管周毛纫血管的丢失关系密切。在多种肾脏疾病的不同阶段确 实有低氧的存在，我们推测存在于肾脏疾病早期的低氧很可能参与了致病过程， 而随后的低氧则促进了疾病的进展，很可能是促进肾脏疾病进展的重要共同作用 机制。我们将利用UUO大鼠这一典型的肾脏小管问质损伤模型来初步证实其术 侧肾脏是否存在低氧，以及低氧与间质炎症和纤维化的相关性．并观察TGF一0 l、 VEGF及其两个受体的变化情况及其与低氧的相关性。 材料与方法：选用1809左右的雄性SD大鼠，随机分为8组，即假手术组(sham 组)、UUO术后12小时组、24小时组、4S小时组、，天纽、5天组、7天组和 10天组，每组4只，结扎左侧输尿管建立UUO模型，观察各组肾功能等血生化 指标、尿蛋白、血压情况，并通过组织病理学、免疫组化、RT-PCR及Western Blot 等技术观察术侧肾脏炎症、纤维化、低氧、TGF·B1、VEGF及其两个受体Flk．1 (VEGF-R2)、Fit—I(VEGF．R1)的变化情况。 结果：各组间大鼠体重无统计学差异。与sham组比较，UUO大鼠血肌酐(Scr) (sham组、术后3天、5天、7天和10天时的Scr值分别为40．6±2．4，65．6± 12-3。55．5±5,9，56．7±2,0，72．5±7．0 utool／L)自术后3天即有不同程度的显 著升高(p0．01)，血尿素氮(BUN)(sham组、术后3天、5天、7天和10天 时韵BUN值分别为4．33±O，57，5．90±1．48，5。S8±1．48，7。50±O，42，8．80± 1．3Iretool／L)自术后7天出现显著升高(p0．Ol，血总胆固醇(sham组、术后 3天、5天、7天和10天时的值分别为2．04±O，23，2．09±O．24，l，97±0．14。2．60 ±O，20．2．66±O．29mmol／L)也自术后7天出现升高(p0．05)，尿蛋白(sham组、 术后3天、7天和10天时的值分别为6r33±2．28，8．06±2．45。5，37±2．06。9 05 ±3．10mg／24h)及血压则在术后无显著差别。术后12小时术侧肾脏皮髓间质内 的ED．1阳性细胞开始增多，术后3天及7天时的每高倍镜视野下的细胞数显著 多于sham组(po，01)。术侧肾脏III型胶原mRNA水平随UUO术后时间延长 而逐渐上调，并自3天后一直维持在较高水平，约为sham组的扣7倍；Masson 复旦大学博士生毕业论文 复旦大学博士生毕业论文 摘要 染色显示皮髓间质纤维化的程度亦逐渐加重，术后lO天时纤维化程度约增加了 10倍。术后12小时，求侧肾脏低氧的范围和程度就有明显的加重，在术后3天 时达到高峰，并持续存在至lO天时，主要集中在各种小管细胞。UUO术后48 小时TGF—Bl mRNA和蛋白水平均出现进行性上升，主要集中在小管上皮细胞。 sham组大鼠肾脏存在基础水平VEGF mRNA和蛋白表达，UUO术后12小时术 侧肾脏两者水平均出现上调，至术后3天升至高峰，随后缓慢下降，但至术后 lO天时仍高于sham组，蛋白表达的变化主要集中在小管上皮细胞。sham组大 鼠肾脏存在基础水平Flk．I(VEGF．R2)mRNA和蛋白的表达．两者在术侧肾脏自 UUO术后12小时即出现升高，均呈先升后降的变化，蛋白表达的变化也主要集 中在小管上皮细胞。sham组大鼠’肾脏存在基础水平Flt．1(VEGF-RI)mRNA和蛋 白的表达，UUO术后24小时术侧肾脏Flt．1 mRNA水平和蛋白表达出现上调，3 天后上调至高峰，至术后lO天时仍维持在高水平，蛋白表达变化也主要集中在 小管上