草间钻头蛛体内wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响农业昆虫与害虫防治专业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需保密，解密时间 年 月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 云目幸彳 时间：加归 年 胁月 力日 学位论文使用授权书 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的 ≤ 猫俐 撇一庞 签名日期：≯Ⅳ年胁月t,O日 签名日期：加∥年N-月 弦日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 草间钻头蛛体内Wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响目录 草间钻头蛛体内Wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响 目录 中文摘要 I Abstract III 第一章文献综述 ．1． 1 Wolbachia的发现 ．1 2 Wolbachh2在无脊椎动物中的分布及系统发育研究 ．1 2．1 Wolbachia在无脊椎动物中的分布 1 2．2 Wolbachia的系统发育 2 3 Wolbachia基因组学和遗传学 ．3 4 Wolbachia对宿主的表型影响 ．．6 4．1细胞质不亲合性(Cytoplasmic Incompatibility,CI) ．．6 4．1．1 CI简介 。6 4．1．2 CI的细胞学机制 。7 4．1．3 CI．Wolbachia和宿主间在分子水平的相互影响 8 4。2诱导孤雌生殖(Parthenogenesis Induction) ．．9 4-3诱导雌性化(Feminization Induction) ．10 4．4杀雄Wolbachia(Male-KiUing Wolbachia) ．11 4．5多潜能Wolbachia ．11 5 Wolbachia对宿主的其它影响 12 6 Wolbachia在宿主种内及种间的传播 13 7 Wolbachia的实际应用 1 4 8关于蜘蛛Wolbachia的研究 。15 9本研究的目的和意义 ．16 10课题的创新之处 ～17 第二章草间钻头蛛体内Wolbachia的感染检测及遗传多样性分析 18 1前言 ．． 18 2材料和方法 19 2．1供试材料 ．．19 2．1．1供试蜘蛛 19 华中农业大学2010届博士研究生学位论文2．1．2 华中农业大学2010届博士研究生学位论文 2．1．2 DNA裂解液及常用缓冲液 19 2．2实验方法 ．．19 2．2．1基因组DNA的提取 ．．19 2．2．2 Wolbachia感染的PCR检测 ．．20 2．2．3 wsp基因片段的纯化及序列测定 ．．21 2．2．3．1 DNA目的片段的胶回收 ： 。21 2．2．3．2靶DNA与载体的链接及链接产物的转化 21 2．2．3．3菌落PCR法筛选重组子 。22 2．2．3．4克隆产物的测序 22 2．2．4草间钻头蛛Wolbachia wsp基因遗传多样性及亲缘关系分析 ．．22 3．结果与分析 ．23 3．1不同地理种群草间钻头蛛Wolbachia的感染检测结果 23 3．2构建在wsp基因基础上的部分地理种群Wolbachia遗传多样性 25 3．2．1 wsp序列多态性分析 。25 3．2．2不同地理种群Wolbachia的遗传距离和亲缘关系分析 ．25 3．3．4建立在单倍型基础上的遗传多样性分析 31 4．讨论 ．34 第三章草间钻头蛛Wolbachia的多位点序列分型 38 l前言 ．38 2材料与方法 ．39 2．1供试材料 39 2．2基因组DNA的提取 40 2．3 Wolbachia感染检测 40 2．4 Wolbachia多位点序列测定 一40 2．5宿主C01序列测定 一 2．6 Wolbachia基因重组分析 2．7 Wolbachia与宿主的相关性分析 2．8建立在ST复合序列基础上的Wolbachia系统发育分析 3结果与分析 草问钻头蛛体内Wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响3．1 草问钻头蛛体内Wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响 3．1 Wolbachia MLST测定结果 ．43 3．2 Wolbachia基因重组分析结果 ．44 3．3 Wolbachia与宿主的进化相关性分析结果 ．45 3．4建立在Wolbachia ST基础上的系统发育分析 。46 4．讨论 ．46 第四章Wolbachia对草间钻头蛛生殖及适合