低氧浓度培养条件下小鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究生理学专业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 学校代码——1 4052 学号』盟202141 156 低氧浓度培养条件下小鼠骨髓间充质 干细胞增殖的研究 Proliferation of mouse bone marrow．．derived mesenchymal stem cells in hypoxic culture 指导教师姓名、职称 婆堡垒塾撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月一苓一直午直月 万方数据 中文摘要目的： 中文摘要 目的： 在体外培养条件下观察低氧浓度对小鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cell，MSC)增殖的影响，并探索其作用机制，以 寻求这种成体干细胞体外扩增的适宜氧浓度。 方法： 设置1％02组(低氧组)和1 8％02组(常氧组)，用小鼠骨髓 细胞做MSC集落形成实验，计算集落的形成率和平均面积；进行 低氧组和常氧组MSC传代细胞的扩增培养，用显微技术做细胞形 态学观察、细胞计数和分裂指数检测，用CCK．8法测定细胞活力， 用流式细胞术做细胞周期分析和细胞凋亡率检测，用ELISA法检测 低氧诱导因子．1a(HIF．1a)表达水平，用免疫细胞化学染色法检测 细胞增殖核抗原(PCNA)和P53蛋白表达水平。 结果： 低氧组MSC集落生成率显著低于常氧组，平均集落面积也小 于常氧组，但无统计学显著性。与常氧组相比，低氧组MSC传代 细胞的HIF．1a蛋白表达水平显著升高。MSC传代细胞在低氧条件 下培养72h后，细胞计数减少，．低氧组与常氧组的差异具有显著性 意义。低氧组MSC传代细胞的分裂指数显著低于常氧组。低氧组 MSC传代细胞的CCK．8实验吸光值略低于常氧组，但差异无显著 万方数据 性意义。与常氧组相比，低氧组MSC传代细胞的G0／G1期百分比 性意义。与常氧组相比，低氧组MSC传代细胞的G0／G1期百分比 升高， S+G2／M期百分比增高，但差异无显著性。低氧组MSC传 代细胞的凋亡率低于常氧组，差异也无显著性。在低氧组，MSC传 代细胞的PCNA标记指数减低，P53标记指数增高，但是与常氧组 的差异无显著性意义。 结论： 培养条件下1％02对小鼠骨髓间充质干细胞的增殖具有一定的 抑制作用，但作用机制尚不明确。 关键词：低氧，增殖，问充质干细胞，骨髓，小鼠 万方数据 ABSTRACTObjective： ABSTRACT Objective： This study aims to observe the effects of a low oxygen concentration on the proliferation of mouse bone marrow-derived mesenchymal stem cells(MSCs)in vitro，and explore the mechanism of action in order to seek a suitable oxygen concentration for the in vitro expansion of these adult stem cells． Methods： Mouse bone marrow cells were exposed to 1％02(hypoxia)and 1 8％02(normoxia)to calculate the MSCs colony forming rate and the average area．To observe the amplification of MSCs both in normoxia and hypoxia，we use microscopy to observe the MSCs morphology， count cells and detect mitotic index．Also，we adopt the CCK·8 method to detect cell viability，flow cytometry to analysis cell circle and detect the apoptosis rate of cells，ELISA to detect the expression of hypoxia induced factor．1 a(HIF．1 a)，immunocytochemical stainning method to detect the proliferating cell nuclear antigen(PCNA)and expression level of P53 protein． Results： IIl 万方数据 The The MSCs colony formation rate in hy