供体骨髓间充质干细胞输注对大鼠移植肝的免疫保护作用的研究外科学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 至)主i丑 日期： !!年』月上日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：当主副导师签名：趑日期： !! 年』月上日 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 供体骨髓间充质干细胞输注对大鼠移植肝的 免疫保护作用的研究 摘要 第一部分大鼠原位肝移植模型及肝移植急性排斥反应模型的建立 目的：建立大鼠原位肝移植模型及稳定的近交系大鼠肝移植急 性排斥反应模型。 方法：SD大鼠为供、受体的同种同基因肝移植20只(SD．SD 组)，DA、Lewis分别为供、受体的同种异基因肝移植20只 (DA．Lewis组)。采用改良的Kamada’S“二袖套法进行大鼠原 位肝移植，充分暴露第一肝门，不翻动肝脏先行门静脉灌注。“双 线牵引法’’行门静脉、肝下下腔静脉袖套吻合。建立近交系大鼠肝 移植急性排斥反应模型，检测肝功能，观察生存期，根据Banff分 级评分方案来评价排斥反应的强度。 结果：供体手术时间(42．2-4．5)min，受体手术时间(45．5± 3．5)min，无肝期(15．04-2．1)min，手术成功率90．0％，1周存活 率85．O％。SD．SD组手术成功19只，术后并发症死亡1例，受体 平均存活时间55．75土3．20天，术后第7天肝功能基本正常，肝组织 病理无明显变化，RAI评分1．75+0．70分。DA．Lewis组手术成功17 只，术后并发症死亡1例，受体平均存活时间10．25+2．57天，术后 第7天ALT，AST及TBIL水平较前者明显升高，差异有显著性， 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 RAI评分为7．854-0．72，属于严重急性排斥反应表现。 结论： (1)采用改良的Kamada’s“二袖套法，改进肝上、下腔静 脉重建及肝脏灌注方法，“双线牵引法”改良门静脉套管技术，成 功建立大鼠原位肝移植模型； (2)DA---,Lewis同种异基因ROLT是稳定的肝移植急性排斥 反应模型。 关键词：肝移植，近交系，大鼠，急性排斥反应，模型 第二部分供体骨髓间充质干细胞的分离培养鉴定 目的：体外分离培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，并 进行鉴定。 方法：密度梯度离心结合贴壁培养法分离培养MSCs，传代扩增， 倒置显微镜进行细胞形态学观察，流式细胞仪检测细胞免疫表型及体 外诱导成骨、脂肪和软骨细胞分化。 结果：密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化MSCs，细胞 呈均一的成纤维细胞样；流式细胞仪检测结果为：CD44、CD29阳性、 CD34、 CD44阴性，说明培养的细胞即非造血干细胞，也非成纤维细 胞；具有多向分化潜能。 结论： (1)本实验采用密度梯度离心结合贴壁法的方法，从大鼠骨髓 n 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 中分离到MSCs； (2)通过形态学、免疫学表型及多向分化潜能证实了其MSCs 特征。 关键词：骨髓间充质干细胞分离培养鉴定大鼠肝移植 第三部分体外试验中间充质千细胞免疫抑制功能的研究 目的：探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在混和淋巴细胞反应 (池C)中对同种异基因T淋巴细胞免疫应答反应的影响，并初步 探讨其作用机制。 方法：建立MSCs和同种异基因淋巴细胞共培养体系，反应体系 总量200p1。以DA大鼠的脾T淋巴细胞为刺激细胞，以Lewis大鼠的脾 T淋巴细胞为反应细胞，分为4组。所有组别按1：1比例加入刺激细 胞和反应细胞，细胞数为lxl05／50I-d。A组：对照组；B组：力[1)klxl03／1pl DA大鼠的MSCs；C组：加入lxl04／10I．d MSCs；D组：加入lxl05／100I-d MSCs。混合培养5天，加入3H．TdRl微居，以液闪测定仪测定各组的 CPM值；混合培养7天，上清ELISA法检测IL．2、IL．4、IL．1 0和IFN-丫 的含量。 结果： MSCs可以抑制池C体系中T淋巴细胞增殖，并呈现出剂 量依赖关系：IL．2和